护肤品环境卫生标准,Hygienic Standard for Cosmetics,中华人民共和国卫生部 二○○七年一月,第四一部分      微生物检验方式,Methods of Microbiological T e st,
,1   范畴 本规范要求了护肤品分子生物学检测的基本上规定。,本标准适用护肤品试品的收集、储存及供检试品制取。, ,2   仪 器和设备,2.1   天平秤。 ,2.2   髙压灭菌器。 ,2.3   震荡器。 ,2.4   三角瓶， 2 5 0 m L 。 ,2.5   夹层玻璃珠。 ,2.6   夹层玻璃棒。 ,2.7   标尺吸管， 1 m L 、 1 0 m L 。 ,2.8   研钵或均质器。 ,2.9   控温水浴箱。 , ,3   培 养基和实验试剂,3.1   生理学盐水 ,成份：钛酸异丙酯 钠                                        8.5g ,纯净水加 至                           1000mL ,溶解后，散装到加玻璃弹珠的三角瓶里，一瓶   90mL ， 103.43kPa （ 1 2 1 ℃   15  lb ） 2 0 m in  ,高压灭菌。 ,3.2   SCDLP 液体培养基 成份：opo结构脂胨      17g 大豆蛋白胨    4g 氧化钠     5G 硫酸铵氢二 钾   2.5G   红提 糖      2.5G 大豆卵磷脂       1g 吐温  8 0      7g 水蒸气蒸馏 水    100mL,制作方法：先将大豆卵磷脂在小量纯净水中升温融解后，再与其他成份混和，加温融解，调 pH ,为 7.2 ～ 7.3 散装， 103.43kPa （ 1 21 ℃   1 5  lb ） 20 m i n 高压灭菌。留意震荡，使沉积于最底层的 吐温 8 0 充分混和，制冷至 25 ℃左右 应用。,注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也能用多胨替代。,3.3   杀菌液体石腊。 ,3.4   杀菌吐温  80 。 , ,4   样 品的采集及注意事项,4. 1   所 收集 的样 品 ， 应 具备 代 表 性 ，一 般 视 每 批化 妆 品 数 量大 小 ， 随 机抽 取 相 应 总数 的 包 装企业。检测时，应各自从2个包裝企业之上的试品中国共产党取   10 g 或   1 0M L 。包裝量低于   40g 的试品，取样量可适度提升试品包裝总数。,
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,水蒸气蒸馏 水                                    100mL,融解后过虑， 103.43kPa （ 1 2 1 ℃   1 5 lb ） 2 0 m in 高压灭菌，装于深棕色试剂瓶，置 4 ℃ 冰 箱 预留。, ,5   操 作流程,5.1   用灭菌塑料吸管汲取   1 ： 1 0 稀释液的检液   2 m L ，分别引入到2个杀菌平皿内，每皿   1 m L 。另 ,取 1 m L 注入到 9 m L 灭菌盐水试管婴儿中（留意勿使塑料吸管触碰液位），更换一支塑料吸管，并充 分搅拌，做成 1 ： 1 0 0 检 液。汲取 2 m L ， 各自引入到2个杀菌平皿内，每皿 1 m L 。 如 试品含 菌量高，还可再稀释液成 1 ： 1 0 00 ， 1 ： 1 0 0 0 0 ，……等，每个稀释液度应换 1 支塑料吸管。,5.2    将融 化 并冷 至   4 5 ℃ ～ 5 0 ℃ 的 卵 不饱和脂肪酸吐 温   8 0   营养成分琼 脂 培养液竭尽到平皿内，每皿约 15 m L ， 随后旋转平皿，使试品与培养液充足混和匀称，待琼脂凝结后，旋转平皿，置  36℃ ± 1 ℃恒温箱 内塑造   48h ± 1h 。另取一个不加样品的灭菌空平皿，添加约   15mL   大豆卵磷脂吐温 8 0 营养成分琼脂培养液，待琼脂凝结后，旋转平皿，置 3 6 ℃ ± 1 ℃ 塑造箱里塑造 4 8 h ± 1h ， 为空 白对比。,5.3   为便于差别护肤品中的颗粒物与菌体，可在每 1 0 0 m L 卵磷脂吐温 8 0 营 养琼脂中添加 1 m L  0.5 ％ 的  TTC 水溶液，若有病菌存有，塑造后菌体呈鲜红色，而护肤品的颗粒物色调无转变。, ,6   菌 落计数方式,先用人眼观查，等级菌体数，随后再用变大 5 倍～ 1 0 倍的高倍放大镜查验，防止忽略。记 下各平皿的菌体数后，求出同一稀释液度各平皿生长发育的均值菌体数。若平皿中有连接成块状的菌 落或花点样菌体扩散生长发育时，该平皿不适合记数。若块状菌体不上平皿中的一半，而其他一半 中菌体数遍布非常匀称，则可将此大半个平皿菌落计数后乘于 2 ，以代表全皿菌体数。, ,7   菌 落计数及汇报方法,7.1   最先选取均值菌体数在 3 0 个～ 30 0 个中间的平皿，做为菌落总数测量的范畴。当仅有 一个稀释液度的均值菌体数合乎此范畴时，就是以该平皿菌体数乘其稀释液倍数（见表 1 中例 1 ） 。,7.2   若有两个稀释液度，其均值菌体数均在 3 0 个～ 3 0 0 个中间，  则应求出两菌落总数之比率 来决策，若其比率小于或等于 2 ， 应 汇报其平均值，若超过 2  则汇报其中稀释液度较低的平皿,的菌体数（见表 1 中例 2 及例 3 ） 。,7.3   若所有稀释液度的均值菌体数均超过   3 0 0   个 ，则应按稀释液度最大的均值菌体数乘于稀释液 倍率汇报之（见表 1 中 例 4 ） 。,7.4   若所有稀释液度的均值菌体数均低于 3 0 个，则应按稀释液度最少的均值菌体数乘于稀释液倍 数汇报之（见表 1 例 5 ） 。,7.5   若所有稀释液度的均值菌体数均没有 3 0 个～ 3 0 0 个中间，在其中一个稀释液度超过 3 0 0 个， 而邻近的另一稀释液度低于 3 0 个时，则以贴近 3 0 或 3 0 0 的平均菌体数乘于稀释倍数汇报之（见,表 1 中例 6 ） 。,7.6   若所有的稀释液度均无菌检测生长发育，汇报数为每  g 或每  mL 小 于  10CFU 。 ,7.7   菌体计数的汇报，菌体数在 1 0 之内时，按登记标值汇报之，超过 1 0 0 时 ， 采用二位有 效数据，在二位有效数字后边的标值，应以四舍五入法测算。为了更好地减少数据后边零的数量， 能用 1 0 的指数来表示（见表 1 报告方法栏）。在汇报菌体数为“不能计”时，应标明试品的 稀释液度。,,
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,三、粪大肠菌群 , ,1   范畴 本规范要求了护肤品中粪大肠菌群的检测方式。 本规范适用护肤品中粪大肠菌群的检测。, ,2    界定 本规范选用以下界定,粪大肠菌群（ Fecal coliforms ）  系 一群需氧及兼性厌氧革兰氏阳性菌呈阴性无芽胞链球菌，在 44.5,℃± 0.5 ℃培 养 2 4 h ～ 48 h 能发醇乳清蛋白产酸并胀气。 该菌立即来源于排泄物，是关键的环境卫生指示菌。, ,3   仪器设备 ,3.1   控温水浴箱或防水防火式恒温箱： 4 4 ℃ ± 0 . 5 ℃ 。 ,3.2   溫度计。 ,3.3   显微镜镜。 ,3.4   载玻片。 ,3.5   打疫苗环。 ,3.6   磁感应炉。 ,3.7   三角瓶， 2 5 0 m L 。 ,3.8   试管婴儿： 1 5 × 1 50 mm 。 ,3.9   小倒管。 ,3. 1 0   pH 计 或  pH 测纸。 ,3 . 1 1   髙压灭菌器。 ,3.12   杀菌吸管， 10 m L 、 1 m L 。 ,3.13   杀菌平皿：直徑  90mm 。 , ,4   培 养基和实验试剂,4.1   二倍乳糖胆盐（含还原剂）培养液 成份：蛋白胨      40g ,猪胆盐                                         10g ,乳清蛋白                                             10g,0 . 4 ％溴甲酚 紫 水溶性 液                  5mL 大豆卵磷脂                    3g 吐温  8 0                                              14g 水蒸气蒸馏 水     100mL,制作方法：将大豆卵磷脂、吐温 8 0 溶解到小量纯净水中。将蛋白胨、胆盐及乳清蛋白融解到其他的 纯净水中，加到一起搅拌，调 pH 到 7.4 ， 添加 0.4 ％溴甲酚紫水溶液，搅拌，分装试管（每 支试管婴儿中加一个小倒管）。 68.95kPa （ 1 15 ℃  10 lb ） 20 m i n 杀菌。,4.2   伊红美兰（ EMB ） 琼脂 ,成份：蛋白胨                                         10g,        乳清蛋白                                             20g , 磷酸氢二钾       3g 琼脂                          40g,
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,2 ％伊红水 水溶液                          20mL ,0 . 5 ％ 美 水蓝 溶 液                       13mL ,水蒸气蒸馏 水                                  1000mL ,制作方法：先将琼脂加到 9 0 0 m L 蒸 馏水里，加温融解，随后添加磷酸氢二钾蛋白胨，搅拌， 使之融解。再以纯净水补充至 1 0 00 m L 。 校准 p H 值 为 7 . 2 ～ 7 . 4 ， 分装于三角瓶内， 103.43kPa,（ 1 2 1 ℃   1 5  lb ） 1 5 m in 高压灭菌预留。临用时添加乳清蛋白并加温溶化琼脂。冷至 60 ℃ 上下无 菌实际操作添加杀菌的伊红美蓝水溶液，混匀。竭尽平皿预留。,4.3   蛋白质胨水（作靛栽培基质实验用） 成份：蛋白胨（或胰蛋白胨）   20g ,氯化钠                                           5g ,水蒸气蒸馏 水                                  1000mL ,制作方法：将以上成份加温溶化，调  pH 数值  7.0 ～ 7 . 2 ， 分装小试管婴儿， 103.43kPa （ 1 21 ℃   15 ,lb ） 1 5 m in 高压灭菌。 ,4.4   靛基质实验试剂 ,柯凡克实验试剂：将 5 g 对二甲羟基苯甲醛融解于 75 m L 戊醇中，随后迟缓添加稀盐酸 25 m L 。 实验方法：打疫苗病菌于蛋白胨水里，于   4 4 ℃± 0.5 ℃培 养   2 4 h ± 1h 。沿壁厚加柯凡克试,剂 0 . 3 m L ～ 0.5mL ，轻拂试管婴儿。阳性者于实验试剂层显深玫瑰红色。 注：蛋白胨应带有丰富多彩的谷氨酸，每次蛋白胨买回来后，先要用已经知道菌种鉴定后才可应用。,4.5   革兰氏上色液：,4 .5.1   染液制取 ,4. 5 .1 . 1   结晶紫上色液： ,结 晶 紫                                                     1g ,9 5 ％ 酒精                                             20mL ,1 ％ 盐酸铵水溶性液                                 80mL ,将结晶紫溶解酒精中，随后与草酸铵水溶液混和。 ,4. 5 .1 . 2   革兰氏碘液： ,碘                                                            1g 碘 化 钾            2g 蒸馏水加至                                                      300mL ,将碘与碘化钾先开展混和，添加纯净水少量，充足振摇，待彻底融解后，再加纯净水至,3 0 0 m L 。 ,4. 5 .1 . 3   脱色液： 95 ％乙醇。 ,4. 5 .1 . 4   复染液： ,（ 1 ）沙黄复染色液： ,沙 黄                                               0.25g ,9 5 ％乙醇                                           10mL 蒸 馏水     90mL 将沙黄融解于酒精中，随后用纯净水稀释液。,（ 2 ） 稀石碳酸复红液：称量偏碱复红 1 0 g ， 研细，加 9 5 ％酒精 1 0 0 m L ， 置放留宿，滤 纸过虑。取该液 10 m L ， 加 5 ％石碳酸溶液 90 m L 混和，即是石碳酸复红液。再取此液 1 0M L 加水 90 m L ， 即是稀石碳酸复红液。,
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,琼 脂                                           20g ,水蒸气蒸馏 水                                  950mL ,pH 7. 0 ± 0.2 ,增菌剂的配置： 3 0 ％卵黄食盐水 5 0 m L 与杀菌过虑的 1 ％亚碲酸钾水溶液 1 0 m L 混和，储存 于电冰箱内。,制作方法：将各成份加到纯净水中，加温烧开彻底融解，冷至   25 ℃± 1 ℃校准   p H 。散装每,瓶 95 m L ， 103.45kPa （ 1 21 ℃   15 lb ）高 压杀菌 15 m in 。 临用时加温融化琼脂，每 95 m L 添加 加热至 50 ℃ 上下的卵黄亚碲酸钾增菌剂 5 m L ， 混匀后竭尽平板电脑。培养液应以高密度不全透明的。 应用前在电冰箱存储不可超出 4 8 h ± 1h 。,4.4   血琼脂培养液,成份：营养成分琼 脂                             100mL ,脱化学纤维羊血（或兔血）               10mL ,制作方法：将营养琼脂加温融化，待冷至   50 ℃上下无 菌操作加入脱纤维羊血，摇匀，做成 平板电脑，置电冰箱内预留。,4.5   甘霖醇发醇培养液,成份：蛋白胨                                         10g 氧化钠       5g 甘露醇    10g 牛肉膏                                           5g ,0 . 2 ％麝香草 酚 蓝溶 液                12mL ,水蒸气蒸馏 水                                  1000mL ,制作方法：将蛋白胨、氧化钠、牛肉膏加到纯净水中，加温融解，调 pH 7 .4 ， 加入甘露醇和 显色剂，搅拌后散装试管婴儿中， 68 . 9 8k Pa （ 1 15 ℃   10 lb ） 2 0 m in 杀菌预留。,4.6   兔（人）血液制取,取   3 . 8 ％ 三聚磷酸钠水溶液， 1 0 3. 4 5k P a （ 1 2 1 ℃   15  lb ） 3 0 m in 高压灭菌， 1 份加兔（人）全 ,血  4 份，混匀静放； 2 00 0 r p m ～ 3000rpm 抽滤  3min ～ 5 m i n 。血球下移，取上边血液。 , ,5   操 作流程,5.1   增菌：取 1 ： 1 0 稀 释的试品打疫苗到 90mL SCDLP 液体培养基中，置 3 6 ℃ ± 1 ℃ 培 养箱， 塑造 2 4 h ± 1h 。,注：如不存在培养液也能用 7 . 5 ％ 氧化钠骨头汤。,5.2   分离：自以上增菌培养液中，取 1 ～ 2  接种环，画线打疫苗在  Baird Parker 氏培养基，如 不存在培养液也可画线打疫苗到血琼脂平板电脑，置 36℃±1℃塑造 24h ～ 4 8h 。 在 血琼脂平板电脑上菌体 呈橙黄色，大而凸起，环形，不全透明，表层光洁，周边有溶血症圈。在 Baird Parker 氏培养液 上为环形，光洁，突起，潮湿，直徑为  2mm ～ 3 m m ，颜色呈深灰色到灰黑色，边沿为浅色，周 围为一浑浊带，在其表层有一透明带。用接种针触碰菌体似有鲜奶油虫胶的柔韧度。不经意会碰到 非人体脂肪融解的相近菌体，但无浑浊带及透明带。挑取单独菌体分纯在血琼脂平板电脑上，置   36,℃± 1 ℃塑造   2 4 h ± 2 h 。 ,5. 3   染 色镜 检： 挑 取 分 纯菌 落 ， 涂 片， 进 行 革 兰氏 染 色 ， 镜检查 。 金 黄 色葡 萄 球 菌 为革 兰 氏 阳性菌，排成红提状，无芽胞，无夹膜，高致病链球菌，菌体较小，直径大约为 0 . 5 ì m ～,1 ì m 。,5. 4   甘 露醇 发醇 试 验 ： 取上 述 分 纯 菌体 接 种 到 甘霖 醇 发 酵 培养 基 中 ， 在培 养 基 液 表面 加 入 ,2 m m ～ 3 m m 的杀菌液体石蜡，置 3 6 ℃ ± 1 ℃ 培养 2 4 h ± 2 h ， 金黄色葡萄球菌应能发醇甘露醇 产酸。,5.5   血液凝结酶实验：汲取 1 : 4 新鮮血液 0 . 5 m L ， 放进杀菌小试管婴儿中，添加待检菌 2 4h ± 1h 骨头汤培养物 0.5mL 。 搅拌，放 3 6 ℃ ± 1 ℃ 恒温箱或恒温水浴槽中， 每三十分钟观查一次， 6 h 以内 如展现 稠状 即是阳 性。 另外以 已经知道 血液凝 固酶 呈阳性和 呈阴性 菌种肉 汤培 养物及 骨头汤 培 养基 各,
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护肤品环境卫生标准

Hygienic Standard for Cosmetics

我国国家卫生部 二○○七年一月

第四一部分    微生物检验方式

Methods of Microbiological Test

一、总则

1   范畴 本规范要求了护肤品分子生物学检测的基本上规定。

本标准适用护肤品试品的收集、储存及供检试品制取。

 

2   仪器和设备

2.1   天平秤。

2.2   髙压灭菌器。

2.3   震荡器。

2.4   三角瓶，250mL。

2.5   夹层玻璃珠。

2.6   夹层玻璃棒。

2.7   标尺吸管，1mL、10mL。

2.8   研钵或均质器。

2.9   控温水浴箱。

 

3   培养基和实验试剂

3.1   生理学盐水

成份：钛酸异丙酯钠                                       8.5g

纯净水加至                          1000mL

溶解后，散装到加玻璃弹珠的三角瓶里，一瓶  90mL，103.43kPa（121℃  15  lb）20min

高压灭菌。

3.2   SCDLP 液体培养基成份：opo结构脂胨     17g 黄豆蛋白胨   4g 氧化钠    5G 硫酸铵氢二钾  2.5G  红提糖     2.5G 卵磷脂      1g 吐温  80      7g 水蒸气蒸馏水   100mL

制作方法：先将卵磷脂在小量纯净水中升温融解后，再与其他成份混和，加温融解，调 pH

为 7.2～7.3 散装，103.43kPa（121℃  15  lb）20min 高压灭菌。留意震荡，使沉积于最底层的 吐温 80 充分混和，制冷至 25℃左右应用。

注：如无opo结构脂胨和黄豆蛋白胨，也能用多胨替代。

3.3   杀菌液体石腊。

3.4   杀菌吐温 80。

 

4   样品的采集及注意事项

4.1   所收集的样品，应具备代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应总数的包装企业。检测时，应各自从2个包裝企业之上的试品中国共产党取 10g 或 10ML。包裝量低于 40g的试品，取样量可适度提升试品包裝总数。

4.2   供检测试品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检测前不得打开，防 止样品被污染。

4.3   收到样品后，应该马上备案，撰写检测编号，并按检测规定尽早检测。如不可以立即检测， 样品应放到室内温度荫凉干躁处，不必冷冻或冷藏。

4.4   若仅有一个样品而另外需做多种分析，如病菌、毒理、化学等，则宜先取出一部分样品 做病菌检测，再将剩下样品做其他剖析。

4.5   在检测全过程中，从打开包装到所有检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散， 常用容器及原材料均应事前杀菌，所有实际操作应在无菌车间内开展，或在相对标准下，按无菌操作原则 要求开展。

4.6   如检出粪大肠菌群或其他病原菌，自汇报传出之日起该菌苗及被检样品应储存一个月。

 

5   供检样品的制取

5.1   液态样品

5.1.1   水溶性的液态样品，可量取 10mL 加到 90ML 杀菌生理食盐水中，如样品低于 十米L， 仍按 10 倍稀释法开展。若为 5mL 则加到 45mL 杀菌盐水，搅拌后，做成 1：10 检液。

5.1.2   油性液态样品，取样品 10mL，先放 5mL 杀菌液体石蜡搅拌，再加 10mL杀菌的吐

温 80，在 40℃～44℃水浴中振荡混和 10min，添加杀菌的盐水 75mL（在 40℃～44℃ 水浴中预温），在 40℃～44℃水浴中乳化，做成 1：10 的悬液。

5.2   膏、霜、溶剂半固态状试品

5.2.1   亲水性的试品：称量 10g，加到配有玻璃弹珠及 90mL杀菌盐水的三角瓶中，充足 振荡搅拌，静放 15min。用其上清液做为 1:10 的检液。

5.2.2   疏水性试品：称量 10g，放到杀菌的研钵中，加 10mL 杀菌液体石蜡，碾磨成浓稠状， 再添加 10mL 杀菌吐温 80，碾磨待溶解后，加 70ML 杀菌生理食盐水，在 40℃～44℃水浴中 充足混和，做成 1：10 检液。

5.3   固态样品

称量 10g，加到 90mL 杀菌盐水中，充足振荡搅拌，使其分散化混悬，静放后，取上 发酵液做为 1：10 的检液。

若有均质器，以上水溶膏、霜、颗粒剂等，可称  10g  样品添加  90mL杀菌盐水， 匀质 1min～1min；疏水性膏、霜及眼线笔、唇膏等，称 10g 样品，加 10mL杀菌液态石蜡，

10mL 吐温 80，70mL 杀菌盐水，匀质 3min～5min。

 

二、菌落总数

 

1   范畴 本规范要求了护肤品中菌落总数的检测方式。 本标准适用护肤品菌落总数的测量。

 

2   界定 本规范选用以下界定

菌体总数（Aerobic bacterial count）是指护肤品检样历经解决，在一定标准下塑造后（如 培养液成份、塑造溫度、塑造時间、pH 值、需氧特性等），1g（1mL）检样中所含菌体的总 数。个人所得結果只包含一群本方式要求的标准下生长发育的嗜中温的需氧性菌落总数。

测定菌落数量便于断定试品被真菌感染的水平，是对试品开展卫生学期评价的综合依

据。

 

3   仪器和设备

3.1   三角瓶，250mL。

3.2   量筒，200mL。

3.3   pH 计或高精密 pH 试纸。

3.4   髙压灭菌器。

3.5   试管婴儿：15×150mm。

3.6   杀菌平皿：直徑 9cm。

3.7   杀菌刻度塑料吸管，10mL、1mL。

3.8   乙醇灯。

3.9   控温培养箱：36℃±1℃。

3.10   变大镜。

 

4   培养基和试剂

4.1   生理学盐水：见通则中 3.1。

4.2   卵磷脂、吐温 80―营养成分琼脂培养液

4.2.1	成分：蛋白胨	20g
	牛肉膏	3g
	氧化钠	5g

 

琼脂                                        15g

大豆卵磷脂                                      1g 吐温  80              7g 水蒸气蒸馏水                                        1000mL

4.2.2   制作方法：先将卵磷脂加到少量水蒸气蒸馏水中，加温溶解，添加吐温  80，将其他成分（除琼 脂外）加到其他的纯净水中，融解。加入已融解的大豆卵磷脂、吐温 80，搅拌，调 pH 数值 7.1～

7.4，添加琼脂，103.45kPa（121℃ 15 lb）20min 高压灭菌，存储于冷在黑暗中预留。

4.3   0.5％氯化三苯四氮唑（2,3,5-triphenyl terazolium chloride，TTC） 成份：TTC      0.5g

蒸馏水                                   100mL

融解后过虑，103.43kPa（121℃  15 lb）20min 高压灭菌，装于深棕色试剂瓶，置 4℃冰箱 预留。

 

5   操作流程

5.1   用灭菌塑料吸管汲取 1：10 稀释液的检液 2mL，分别引入到2个杀菌平皿内，每皿 1mL。另

取 1mL 注入到 9mL 灭菌盐水试管婴儿中（留意勿使塑料吸管触碰液位），更换一支塑料吸管，并充 分搅拌，做成 1：100 检液。汲取 2mL，各自引入到2个杀菌平皿内，每皿 1mL。如试品含 菌量高，还可再稀释液成 1：1000，1：10000，……等，每个稀释液度应换 1 支塑料吸管。

5.2    将融化并冷至  45℃～50℃的卵不饱和脂肪酸吐温  80  营养成分琼脂培养液竭尽到平皿内，每皿约15mL，随后旋转平皿，使试品与培养液充足混和匀称，待琼脂凝结后，旋转平皿，置 36℃±1℃培养箱内培养  48h±1h。另取一个不用试品的杀菌空平皿，添加约  15mL  大豆卵磷脂吐温80 营养成分琼脂培养基，待琼脂凝结后，旋转平皿，置 36℃±1℃培养箱内培养 48h±1h，为空 白对比。

5.3   为便于差别护肤品中的颗粒物与菌体，可在每 100mL 卵磷脂吐温 80 营养琼脂中添加 1mL 0.5％的 TTC 水溶液，若有病菌存有，培养后菌体呈鲜红色，而护肤品的颗粒物色调无转变。

 

6   菌落计数方式

先用人眼观查，等级菌体数，随后再用变大 5 倍～10 倍的高倍放大镜查验，防止忽略。记 下各平皿的菌体数后，求出同一稀释液度各平皿生长发育的均值菌体数。若平皿中有连接成块状的菌 落或花点样菌体扩散生长发育时，该平皿不适合记数。若块状菌体不上平皿中的一半，而其他一半 中菌体数遍布非常匀称，则可将此大半个平皿菌落计数后乘于 2，以代表全皿菌体数。

 

7   菌落计数及汇报方法

7.1   最先选取均值菌体数在 30 个～300 个中间的平皿，做为菌落总数测量的范畴。当仅有 一个稀释液度的均值菌体数合乎此范畴时，就是以该平皿菌体数乘其稀释液倍数（见表 1 中例 1）。

7.2   若有两个稀释液度，其均值菌体数均在 30 个～300 个中间，则应求出两菌落总数之比率 来决策，若其比率小于或等于 2，应汇报其平均值，若超过 2  则汇报其中稀释液度较低的平皿

的菌体数（见表 1 中例 2 及例 3）。

7.3   若所有稀释液度的均值菌体数均超过  300  个，则应按稀释液度最大的均值菌体数乘于稀释液 倍率汇报之（见表 1 中例 4）。

7.4   若所有稀释液度的均值菌体数均低于 30 个，则应按稀释液度最少的均值菌体数乘于稀释液倍 数汇报之（见表 1 例 5）。

7.5   若所有稀释液度的均值菌体数均没有 30 个～300 个中间，在其中一个稀释液度超过 300 个， 而邻近的另一稀释液度低于 30 个时，则以贴近 30 或 300 的平均菌体数乘于稀释倍数汇报之（见

表 1 中例 6）。

7.6   若所有的稀释液度均无菌检测生长发育，汇报数为每 g 或每 mL 小于 10CFU。

7.7   菌体计数的汇报，菌体数在 10 之内时，按登记标值汇报之，超过 100 时，采用二位有 效数据，在二位有效数字后边的标值，应以四舍五入法测算。为了更好地减少数据后边零的数量， 能用 10 的指数来表示（见表 1 报告方法栏）。在汇报菌体数为“不能计”时，应标明试品的 稀释液度。

1	1365	164		20		─	16400		16000 或 1.6×104
2	2760	295		46		1.6	38000		38000 或 3.8×104
3	2890	271		60		2.2	27100		27000 或 2.7×104
4	不能计	4650		513		─	513000		510000 或 5.1×105
5	27	11	5		─			270		270 或 2.7×102
6	不能计	305	12		─			30500		31000 或 3.1×104

 

7

0

0

0

─

＜１×10

*CFU：菌落形成企业。

 

三、粪大肠菌群

 

1   范畴 本规范要求了护肤品中粪大肠菌群的检测方式。 本规范适用护肤品中粪大肠菌群的检测。

 

2    界定 本规范选用以下界定

粪大肠菌群（Fecal coliforms）系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阳性菌呈阴性无芽胞链球菌，在 44.5

℃±0.5℃培养 24h～48h 能发醇乳清蛋白产酸并胀气。 该菌立即来源于排泄物，是关键的环境卫生指示菌。

 

3   仪器设备

3.1   控温水浴箱或防水防火式恒温箱：44℃±0.5℃。

3.2   溫度计。

3.3   显微镜镜。

3.4   载玻片。

3.5   打疫苗环。

3.6   磁感应炉。

3.7   三角瓶，250mL。

3.8   试管婴儿：15×150mm。

3.9   小倒管。

3.10   pH 计或 pH 测纸。

3.11   髙压灭菌器。

3.12   杀菌吸管，10mL、1mL。

3.13   杀菌平皿：直徑 90mm。

 

4   培养基和实验试剂

4.1   二倍乳糖胆盐（含还原剂）培养液 成份：蛋白胨     40g

猪胆盐                                        10g

乳清蛋白                                            10g

0.4％溴甲酚紫水溶性液                 5mL 大豆卵磷脂                   3g 吐温  80                                              14g 水蒸气蒸馏水    100mL

制作方法：将大豆卵磷脂、吐温 80 溶解到小量纯净水中。将蛋白胨、胆盐及乳清蛋白融解到其他的 纯净水中，加到一起搅拌，调 pH 到 7.4，添加 0.4％溴甲酚紫溶液，搅拌，散装试管（每 支试管婴儿里加一个小倒管）。68.95kPa（115℃  10 lb）20min 灭菌。

4.2   伊红美兰（EMB）琼脂

成份：蛋白胨                                        10g

        乳清蛋白                                            20g 

 磷酸氢二钾      3g 琼脂                         20g

2％伊红水水溶液                         20mL

0.5％美水蓝溶液                      13mL

水蒸气蒸馏水                                 1000mL

制作方法：先将琼脂加到 900mL 蒸馏水里，加温融解，随后添加磷酸氢二钾蛋白胨，搅拌， 使之融解。再以纯净水补充至 1000mL。校准 pH 值为 7.2～7.4，散装于三角瓶内，103.43kPa

（121℃  15  lb）15min 髙压灭菌预留。临用时添加乳清蛋白并加温溶化琼脂。冷至 60℃上下无 菌实际操作添加灭菌的伊红美蓝水溶液，混匀。竭尽平皿预留。

4.3   蛋白质胨水（作靛栽培基质实验用） 成份：蛋白胨（或胰蛋白胨）  20g

氧化钠                                          5g

水蒸气蒸馏水                                 1000mL

制法：将以上成分加热融化，调 pH 数值 7.0～7.2，分装小试管婴儿，103.43kPa（121℃  15

lb）15min 高压灭菌。

4.4   靛基质实验试剂

柯凡克实验试剂：将 5g 对二甲羟基苯甲醛融解于 75mL 戊醇中，随后迟缓添加稀盐酸 25mL。 实验方法：打疫苗病菌于蛋白胨水里，于  44℃±0.5℃培养  24h±1h。沿壁厚加柯凡克试

剂 0.3mL～0.5mL，轻拂试管婴儿。阳性者于实验试剂层显深玫瑰红色。 注：蛋白胨应带有丰富多彩的谷氨酸，每次蛋白胨买回来后，先要用已经知道菌种鉴定后才可应用。

4.5   革兰氏上色液：

4.5.1   染液制取

4.5.1.1   结晶紫上色液：

结晶紫                                                    1g

95％酒精                                            20mL

1％盐酸铵水溶性液                                80mL

将结晶紫溶解酒精中，随后与草酸铵水溶液混和。

4.5.1.2   革兰氏碘液：

碘                                                           1g 碘化钾           2g 蒸馏水加至                                                     300mL

将碘与碘化钾先开展混和，添加纯净水少量，充足振摇，待彻底融解后，再加纯净水至

300mL。

4.5.1.3   脱色液：95％乙醇。

4.5.1.4   复染液：

（1）沙黄复染色液：

沙黄                                              0.25g

95％乙醇                                          10mL 蒸馏水    90mL 将沙黄融解于酒精中，随后用纯净水稀释液。

（2）稀石碳酸复红液：称量偏碱复红 10g，研细，加 95％酒精 100mL，置放留宿，滤 纸过虑。取该液 10mL，加 5％石碳酸溶液 90mL 混和，即是石碳酸复红液。再取此液 10ML 加水 90mL，即是稀石碳酸复红液。

4.5.2   染色法

4.5.2.1   将涂片在火苗上固定不动，滴入结晶紫上色液，染 1min，水清洗。

4.5.2.2   滴加革兰氏阳性菌碘液，功效 1min，水清洗。

4.5.2.3   滴加 95％乙醇褪色，约 30s，或将酒精滴满全部玻片，马上倾去，再用酒精滴满整 个玻片，褪色 10s，水洗。

4.5.2.4   滴加复染色液，复染 1min，水清洗，待干，镜检查。

4.5.3     染色結果 革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阳性菌阴性菌呈鲜红色。

注：如用 1:10 稀释液石碳酸复红上色液作复染，复染時间仅需 10s。

 

5   操作流程

5.1   取 10mL  1：10 稀释的检液，加到 10mL 二倍乳清蛋白胆盐（含还原剂）培养液中，置 44

℃±0.5℃培养箱中塑造 24h～48h，如不产酸都不胀气，则汇报为粪大肠菌群呈阴性。

5.2   如产酸胀气，画线打疫苗到伊红美蓝琼脂平板电脑上，置  36℃±1℃培养  18h～24h。另外取 该细胞培养液 1～2 滴打疫苗到蛋白胨水里，置 44℃±0.5℃塑造 24h±1h。

经培养后，在以上平板电脑上观查有没有典型菌落生长发育。粪大肠菌群在伊红美蓝琼脂培养液上 的典型性菌落呈深紫黑，环形，边缘齐整，表面光洁潮湿，常具备金属光泽。也是有的呈紫黑色 色，不带或有点金属光泽，或浅紫色，中心较深的菌落，亦常为粪大肠菌群，应留意选择。

5.3   挑取上述异常菌落，玻片作革兰氏染色镜检查。

5.4   在蛋白胨水细胞培养液中，添加靛栽培基质实验试剂约  0.5mL，观查靛栽培基质反映。阳性者液位呈玫 瑰鲜红色；阴性反应液位呈实验试剂原色。

 

 

6   检验结果汇报 依据发醇乳清蛋白产酸胀气，平板电脑上面有典型性菌落，并经确认为革兰氏阳性菌呈阴性短链球菌，靛栽培基质试

验呈阳性，则可汇报被检试品中验出粪大肠菌群。

 

四、铜绿假单胞菌

1   范畴 本规范要求了护肤品中铜绿假单胞菌的检测方式。 本标准适用护肤品中铜绿假单胞菌的检测。

 

2   界定 本标准选用以下界定。

铜绿假单胞菌（Pseudomonas  aeruginosa）属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，空气氧化 酶呈阳性，能造成绿脓菌素。除此之外还能汽化果胶，复原磷酸盐为亚硝酸钠，在 42℃±1℃标准 下会生长发育。

该菌对人会有发病力，可使患处溃烂，造成败血病等。

 

3   仪器设备

3.1   塑造箱：42℃±1℃、36℃±1℃。

3.2   三角瓶，250mL。

3.3   试管婴儿：15×150mm。

3.4   杀菌平皿：直徑 90mm。

3.5   杀菌刻度塑料吸管，10mL、1mL。

3.6   显微镜镜。

3.7   载玻片。

3.8   打疫苗针、接种环。

3.9   磁感应炉。

3.10   髙压灭菌器。

 

4   培养基和实验试剂

4.1   SCDLP 液体培养基 见总则中 3.2。

4.2   十六烷基三羟基溴化铵培养液

成份：牛肉膏                                          3g 蛋白胨                 10g 氧化钠                                                 5g 十六烷基三羟基溴化铵                                                  0.3g 琼脂                    20g 水蒸气蒸馏水                                            1000mL

制作方法：除琼脂外，将以上成份混和加温融解，调 pH 为 7.4～7.6，添加琼脂，68.95kPa

（115℃  10 lb）20min 灭菌后，做成平板电脑预留。

4.3   乙酰胺培养液

成份：乙酰胺                                     10.0g 钛酸异丙酯钠      5.0g 没有水硫酸铵氢二钾                                         1.39g

没有水硫酸铵二氢钾                       0.73g 盐酸镁（MgSO4.7H2O）                                                   0.5g 酚红      0.013g 琼脂                                                         20g 水蒸气蒸馏水   1000mL

制作方法：除琼脂和酚红外线，将其他成份加到纯净水中，加温融解，调 pH 为 7.2，添加琼 脂、酚红，103.43kPa（121℃  15 lb）20min 髙压灭菌后，做成平板电脑预留。

4.4   绿脓菌素测量用培养液

成份：蛋白质胨                                        20g 钛酸异丙酯镁           1.4g 盐酸钾                                                     10g 琼脂               18g 凡士林（化学纯）                                            10g 水蒸气蒸馏水    1000mL

制作方法：将蛋白胨、氧化镁和硫酸铵加到纯净水中，升温使其融解，调 pH 至 7.4，添加 琼脂和凡士林，加温融解，散装于试管婴儿内，68.95kPa（115℃  10 lb）20min高压灭菌后，做成

斜坡预留。

4.5   果胶培养基

成份：牛羊肉膏                                          3g 蛋白质胨                  5g 明胶                                              120g 水蒸气蒸馏水  1000mL

制作方法：取各成份加到纯净水中泡浸 20min，随时随地拌和升温使之融解，调 pH 至 7.4，分装 于试管婴儿内，经 68.98kPa（115℃  10 lb）20min 灭菌后，站立做成高层住宅预留。

4.6   氰化钠盐蛋白胨水培养液

成份：蛋白质胨                                        10g 酵母菌浸膏                       3g 氰化钠钾                                          2g 亚硝酸钠             0.5g 水蒸气蒸馏水                                        1000mL

制作方法：将蛋白胨和酵母浸膏加到纯净水中，加温使之融解，调 pH 为 7.2，煮沸过虑后 补充水率，添加硝酸钾和亚硝酸钠，融解搅拌，散装到加上小倒管的试管婴儿中，68.98kPa（115

℃  10 lb）50min 杀菌储备用。

4.7   一般琼脂斜坡培养液

成份：蛋白质胨                                        10g 牛羊肉膏                3g 钛酸异丙酯钠                                                 5g 琼脂             15g 水蒸气蒸馏水                                           1000mL

制作方法：除琼脂外，将其他成份融解于纯净水中，调 pH 为 7.2～7.4，添加琼脂，加温溶 解，散装试管婴儿，103.45kPa（121℃  10 lb）20min 高压灭菌后，做成斜坡预留。

 

5   操作流程

5.1   增菌培养：取 1:10 试品封闭液 10mL 加到 90ML  SCDLP 液体培养基中，置 36℃±1℃

 塑造  18h～24h。若有铜绿假单胞菌生长发育，细胞培养液表层多有一层薄菌膜，细胞培养液常呈浅绿色 或深蓝色。

5.2   分离培养：从培养液的薄膜处挑取培养物，划线接种在十六烷三羟基溴化铵琼脂平板 上，置 36℃±1℃塑造 18h～24h。凡铜绿假单胞菌在这里培养液上，其菌体平扁无定形，向周 边外扩散或略微扩散，表层潮湿，菌体呈灰白，菌体周边培养液常外扩散有水溶黑色素，此培 养基可选择性强，肠子艾希氏菌不可以生长发育，革兰氏阳性菌生长发育较弱。

在缺乏十六烷三羟基溴化铵琼脂时也能用乙酰胺培养液开展分离出来，将菌液画线打疫苗于平 板上，放 36℃±1℃塑造 24h±2h，铜绿假单胞菌在这里培养液上生长发育优良，菌体平扁，边沿 不齐，菌体周边培养液有点淡粉色，其他菌不生长发育。

5.3   染色镜检：挑取可疑的菌落，玻片，革兰氏染色，镜检为革兰氏呈阴性者应进行氧化酶 实验。

5.4   氧化酶实验：取一一小块洁净的乳白色滤纸片放到灭菌平皿内，用无菌玻璃棒挑取铜绿假 单胞菌异常菌体涂在过滤纸上面，随后在其上滴加一滴新配置的 1％二甲基对苯二胺标准溶液，在

15s～30s 之内，发生淡粉色或暗紫色时，为氧化酶实验呈阳性；若塑造物不变色，为空气氧化酶试 验呈阴性。

5.5   绿脓菌素实验：取异常菌体 2 个～3 个，各自打疫苗在绿脓菌素测量培养液上，置 36℃

±1℃塑造  24h±1h，加入氯仿  3mL～5mL，充足震荡使塑造物中的绿脓菌素融解于氯仿液 内，待氯仿萃取液呈深蓝色时，用塑料吸管将氯仿移到另一试管婴儿中并添加 1mol/L 的硫酸 1mL 上下， 震荡后，静置一会儿。如顶层盐酸液内发生粉色色到紫鲜红色时为阳性，表明被检物中有绿脓 菌素存有。

5.6   硝磷酸盐复原产气试验：挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，接种在硝酸盐胨水栽养基 中，置 36℃±1℃塑造 24h±2h，观察結果。凡在磷酸盐胨水培养液内的小倒管内有汽体者， 即是呈阳性，说明该菌能复原磷酸盐，并将亚硝酸钠溶解造成N2。

5.7   明黏剂化试验，取铜绿假单胞菌可疑菌落的纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置

36℃±1℃培养 24h±2h，取下放电冰箱 10min～30min，如仍呈溶解状或表面溶解时即是明胶 液化实验呈阳性；如凝结不溶者为呈阴性。

5.8  42℃生长试验：挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，打疫苗在普通琼脂斜面培养基上， 放到 42℃±1℃恒温箱中，塑造 24h～48h，铜绿假单胞菌能生长发育，为呈阳性，而类似的莹光假 单胞菌则不可以生长发育。

 

6   检验结果汇报 被检样品经增菌分离出来塑造后，经确认为革兰氏阳性菌呈阴性链球菌，抗霉素及绿脓菌素实验皆为阳

性者，就可以汇报被检试品中验出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素实验呈阴性而液化明胶、磷酸盐还 原产地气和 42℃生长发育实验三者皆为呈阳性时，仍可汇报被检试品中验出铜绿假单胞菌。

五、橙黄色链球菌

1   范畴 本规范要求了护肤品中金黄金色链球菌的检测方式。 本标准适用护肤品中橙黄色链球菌的检测。

 

2   界定 本标准选用以下界定

金黄色色红提球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏呈阳性革兰阴性杆菌，呈红提状排序，无芽胞， 无荚膜，能溶解甘露醇，血液凝结酶呈阳性。

该菌是葡萄球菌中对人们致病力最強的一种，能造成身体部分化脓性病灶，比较严重时可导 致败血症。

 

3   仪器和设备

3.1   显微镜镜。

3.2   控温培养箱：36℃±1℃。

3.3   抽滤机。

3.4   杀菌吸管，1mL、10mL。

3.5   杀菌试管：15×1五十米m。

3.6   载玻片。

3.7   乙醇灯。

 

4   培养基和实验试剂

4.1   SCDLP  液体培养基 见总则中 3.2。

4.2   7.5％的氧化钠骨头汤

成份：蛋白质胨                                  10g 牛羊肉膏           3g 钛酸异丙酯钠                                               75g

纯净水加至                         1000mL

制作方法：将以上成份加温融解，调 pH 为 7.4，散装，103.43kPa（121℃  15  lb）15min 高 压杀菌。

4.3   Baird Parker 平板电脑

成份：胰蛋白质胨                                   10g 牛肉膏      5g 酵母菌浸膏        1g 甲苯酸钠                              10g 甘氨酸    12g 氯化锂（LiCl?6H2O）                            5g

琼脂                                          20g

水蒸气蒸馏水                                 950mL

pH7.0±0.2

增菌剂的配置：30％卵黄食盐水 50mL 与杀菌过虑的 1％亚碲酸钾水溶液 10mL 混和，储存 于电冰箱内。

制作方法：将各成份加到纯净水中，加温烧开彻底融解，冷至  25℃±1℃校准  pH。散装每

瓶 95mL，103.45kPa（121℃  15 lb）高压杀菌 15min。临用时加温融化琼脂，每 95mL 添加 加热至 50℃上下的卵黄亚碲酸钾增菌剂 5mL，混匀后竭尽平板电脑。培养液应以高密度不全透明的。 应用前在电冰箱存储不可超出 48h±1h。

4.4   血琼脂培养液

成份：营养成分琼脂                            100mL

脱化学纤维羊血（或兔血）              10mL

制作方法：将营养琼脂加温融化，待冷至  50℃上下无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀，制成 平板，置冰箱内备用。

4.5   甘霖醇发醇培养液

成份：蛋白胨                                        10g 氧化钠      5g 甘露醇   10g 牛肉膏                                          5g

0.2％麝香草酚蓝溶液               12mL

水蒸气蒸馏水                                 1000mL

制作方法：将蛋白胨、氧化钠、牛肉膏加到纯净水中，加温融解，调 pH7.4，加入甘露醇和 显色剂，搅拌后散装试管婴儿中，68.98kPa（115℃  10 lb）20min 杀菌备用。

4.6   兔（人）血液制取

取 3.8％三聚磷酸钠水溶液，103.45kPa（121℃  15  lb）30min 高压灭菌，1 份加兔（人）全

血 4 份，混匀静放；2000rpm～3000rpm 抽滤 3min～5min。血球下移，取上边血液。

 

5   操作流程

5.1   增菌：取 1：10 稀释的试品打疫苗到 90mL SCDLP 液体培养基中，置 36℃±1℃培养箱， 塑造 24h±1h。

注：如不存在培养基也可用 7.5％氯化钠肉汤。

5.2   分离出来：自以上增菌细胞培养液中，取 1～2  接种环，画线打疫苗在Baird Parker 氏培养基，如 不存在培养基也可画线打疫苗到血琼脂平板电脑，置 36℃±1℃塑造 24h～48h。在血琼脂平板电脑上菌体 呈橙黄色，大而凸起，环形，不全透明，表层光洁，周边有溶血症圈。在 Baird Parker 氏培养基 上为环形，光洁，突起，潮湿，直徑为  2mm～3mm，颜色呈深灰色到灰黑色，边沿为浅色，周 围为一浑浊带，在其表层有一透明带。用接种针触碰菌体似有鲜奶油虫胶的柔韧度。不经意会碰到 非人体脂肪融解的相近菌体，但无浑浊带及透明带。挑取单独菌体分纯在血琼脂平板电脑上，置  36

℃±1℃塑造 24h±2h。

5.3   染色镜检：挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检查。金黄色葡萄球菌为革兰氏 阳性菌，排成红提状，无芽胞，无夹膜，高致病链球菌，菌体较小，直径大约为 0.5ìm～

1ìm。

5.4   甘露醇发醇试验：取上述分纯菌体接种到甘霖醇发酵培养基中，在培养基液表面加入

2mm～3mm 的杀菌液体石蜡，置 36℃±1℃培养 24h±2h，金黄色葡萄球菌应能发醇甘露醇 产酸。

5.5   血液凝结酶实验：汲取 1:4 新鮮血液 0.5mL，放进杀菌小试管婴儿中，添加待检菌 24h±1h 骨头汤培养物 0.5mL。搅拌，放 36℃±1℃恒温箱或恒温水浴槽中，每三十分钟观查一次，6h 以内 如展现稠状即是阳性。另外以已经知道血液凝固酶呈阳性和呈阴性菌种肉汤培养物及骨头汤培养基各

0.5mL，分别添加杀菌 1:4 血液 0.5mL，搅拌，做为对比。

 

6   检验结果汇报 凡在上述挑选平板电脑上面有异常菌体生长发育，经上色镜检查，证实为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发醇甘露醇产酸，血液凝结酶实验阳性者，可汇报被检试品验出金黄色葡萄球菌。

六、黄曲霉菌和酵母

1   范畴 本规范要求了护肤品中黄曲霉菌和酵母数的检验方式。 本规范适用于各种各样化妆品中霉菌和酵母菌的计数。

 

2   界定 本规范选用以下界定。

霉菌和酵母菌数测定（Determination of molds and yeast count）就是指化妆IQC样在一定条 件下塑造后，1g 或 1mL 化妆品中所环境污染的活的霉菌和酵母菌总数，藉以断定化妆品被霉菌 和酵母菌环境污染水平以及一般卫生条件。

己方法依据霉菌和酵母菌独有的形状和塑造特点，在虎红培养液上，置 28℃±2℃塑造72h，计算所生长发育的霉菌和酵母菌数。

 

3   仪器和设备

3.1   塑造箱：28℃±2℃。

3.2   震荡器。

3.3   天平秤。

3.4   三角瓶，250mL。

3.5   试管婴儿：15×150mm。

3.6   平皿：直徑 9cm。

3.7   塑料吸管，1米L、10mL。

3.8   量筒，200mL。

3.9   乙醇灯。

3.10   髙压灭菌器。

 

4   培养基和实验试剂

4.1   生理学盐水 见通则中 3.1。

4.2   虎红（孟加拉国红）培养液

成份：蛋白胨                                          5g 葡萄糖水          10g 磷酸二氢钾                                                 1g 盐酸镁（含 7H2O）     0.5g 琼脂                                            20g

1/3000 虎红溶液                    100mL

（四氯四碘荧光素）

水蒸气蒸馏水                                 1000mL

氯霉素                                   100mg

制作方法：将上述各成份（除虎红外线）添加水蒸气蒸馏水中融解后，再添加虎红水溶液。分装后，103.43kPa（121℃  15 lb）20min  高压灭菌，另用小量酒精融解氯霉素，过虑融解后添加培养基中，如果没有氯霉素，应用时每 100mL 加氨苄青霉素 30mg。

 

5   操作流程

5.1   试品稀释 见菌落总数测量中 6.1。

5.2   取  1：10、1：100、1：1000  的检液各  1mL  各自引入杀菌平皿内，每一个稀释液度各用  2

个平皿，引入溶化并冷至 45℃±1℃上下的虎红培养基，充足摇匀。凝固后，翻转平板，置

28℃±1℃培养  72h±1h，记数平板内生长发育的霉菌和酵母菌数。若有霉菌扩散生长发育，为防止 危害其他黄曲霉菌和酵母的记数时，于 48h±2h 应立即将此平板取下记数。

5.3   计算方法：先点数每一个平板上生长发育的霉菌和酵母菌菌落数，求出每一个稀释度的平均菌 落数。判断結果时，应选择菌体数在 5 个～50 个范畴以内的平皿记数，乘于稀释倍数后， 即是每 g（或每 mL）检样中常含的黄曲霉菌和酵母数。其他范畴内的菌体数汇报应参考菌体 数量的汇报方式汇报之。

5.4   每 g（或每 mL）化化妆产品含黄曲霉菌和酵母数以 CFU/g（mL）表明。

 

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