, 1          目地,创建无菌车间落菌检测规范操作流程，标准无菌车间落菌的检验。, 2          范畴,适用无菌车间（包含净化工作台）落菌的检测和自然环境认证。, 3          岗位职责,QA、QC工作人员阅签。, 4          內容,4.1    参照规范：GB/T 16293-2010,4.2    测试标准,本测试标准为记数浓度值法，即根据搜集飘浮在空气中的潜在性颗粒于专业的培养液（挑选能确认其可以适用微生物菌种生长发育的培养液），经多个時间和适合的生长发育标准让其繁育到由此可见的菌落计数，以判断该无菌车间的微生物菌种浓度值。,4.3    测试设备、輔助机器设备和培养液,落菌采样器、细胞培养皿（采用与仪器设备相一致的细胞培养皿）、培养液、恒温培养箱、髙压灭菌设备。,4.4    测试状态及检测時间,4.4.1   静态数据和动态性二种情况均可开展检测，静态数据检测时，房间内测试工程师不可超过两人。,4.4.2   在静态数据a检测时，单边流无菌车间（区），检测在空调净化系统软件一切正常运作時间不少于十分钟后逐渐；非单边流无菌车间（区），检测在空调净化系统软件一切正常运作不少于三十分钟后逐渐。在静态数据b检测时，单边流无菌车间（区），检测在生产制造实际操作工作人员撤出当场并历经十分钟自净作用后逐渐；非单边流无菌车间（区），检测在生产制造实际操作工作人员撤出当场并历经二十分钟自净作用后逐渐。,4.5    取样点的明确,4.5.1   至少取样点数量见表1，每一次最少取样量见表2。,表1 至少取样点数量,  ,表2 最少取样量, ,4.5.2   取样点部位布局宜务求匀称，防止取样点在部分地区过度稀少，取样点依照《洁净区环境监控管理规程》配件×××生产车间 洁净度等级检测取样点布局的规定布局，每一个取样点一般取样一次。,4.5.3   工作区域取样点部位距地0.8米~1.5m上下（稍高于工作台面），正压送风口测量点部位离去排风面三十厘米上下，可在主要设备或重要工作中主题活动范畴处提升测量点。,4.6    检测提前准备,4.6.1   采样器在进到被测地区前先清理表层，随后用75%医用酒精消毒一遍或储放于被测地区内，与被检测地区一起消毒杀菌（用以A级无菌车间的采样器务必事先放到被测屋子里）。,4.6.2   A/B级区选用一次性细胞培养皿，其他地区按无菌操作原则规定，在中检室净化工作台上提早制取塑造预留（将杀菌后的培养液用水浴融解，制冷至约50-60℃，Φ90mm细胞培养皿每一个竭尽约20ml培养液，Φ150mm培每一个竭尽约30ml培养液），细胞培养皿盖上后在室内温度下发至凝结。自做好的细胞培养皿在无菌车间内储放不超过两天，2~8℃储存的细胞培养皿一般不超过1周，一次性细胞培养皿在标明的有效期限内应用，到期不可应用。,4.6.3   A/B级区应用的细胞培养皿在地区消毒杀菌前一次性传到，随自然环境一起消毒杀菌，在消毒剂拿取间铁架子上储存，在有效期限内应用。如要临时性传到，则务必在前一天臭氧杀菌前根据C级与B级不锈钢传递窗传到B级区开展臭氧杀菌，第二天应用。传到前表层也务必用75%酒精擦拭。其他地区用细胞培养皿按物件传到规定当日传到应用。,4.6.4   取样前，先用75%乙醇清理采样器的机盖、轮盘及其外罩的内外边（FKC型蜉蝣气体尘菌采样器用乙醇清理取样头）。,4.6.5   检测具体步骤见“JYQ-Ⅱ型落菌采样器规范操作流程或FKC-1型蜉蝣气体尘菌采样器规范操作流程”。,4.6.6   取样完毕后，盖上细胞培养皿外盖，在细胞培养皿上标明全部信息内容（包含产品批号，置放部位等），将细胞培养皿用适合的方法绑扎，倒放置30~35℃恒温培养箱中塑造，塑造時间不少于2天。,4.6.7   塑造完毕后逐一查验细胞培养皿，用人眼对细胞培养皿上全部的菌体立即记数、标识，随后用5~10倍高倍放大镜查验，有无忽略。若细胞培养皿上面有两个或两个之上的菌体重合，可辨别时仍以两个或两个之上菌落计数。,4.7    检测纪录应包括以下几点,4.7.1  被检测地区名字、检测日期、检测根据、检查者名字、测试设备及测试标准的叙述，检测时需选用的情况和房间内测试工程师数，取样点数量，检测频次、取样总流量，检测結果（包含全部统计分析测算材料）等。,4.7.2  若为动态性检测，还应纪录当场实际操作工作人员总数，当场机器设备运行状况等。,4.8    結果测算,4.8.1   用记数方式 得到每个细胞培养皿的菌体数。,4.8.2   每一个测量点的落菌均值浓度计算按住式开展,
,4.9    結果鉴定,4.9.1   每一个测量点的落菌均值浓度值务必小于所选中标准中的界线。,4.9.2   在静态数据检测时，若某测量点的落菌均值菌浓度值超出标准，则应再次取样2次，2次检测結果均达标才可以判为合乎。,4.9.3   若有超出要求者，务必立即与生产制造单位联络，对该地区开展消毒杀菌或其他解决，随后再次检测至达标。,4.10 日常监管,4.10.1  落菌日常监管设纠偏装置程度和警示程度（程度范畴及抽样次数见《洁净区环境监控管理规程》），以确保无菌车间（区）的微生物菌种浓度值遭受操纵，按时检验以查验微生物菌种负载及其消毒液的法律效力，并且做好趋向剖析。静态数据和动态性的监管都能够选用该方式 。,4.10.2  针对落菌的抽样次数，假如发生以下状况应考虑到改动，在评定下列状况后，也应明确别的新项目的检验次数,――持续超出纠偏装置程度和警示程度；,――停产時间比预估增加；,――重要地区内发觉有环境污染存有；,――在生产制造期内，空气过滤系统软件开展一切重特大的检修；,――日常操作记录体现出选择性的数据信息；,――消毒杀菌技术规范的更改；,――造成生物入侵的安全事故等；,――当生产线设备有重特大检修或提升机器设备时；,――当无菌车间（区）构造或地区遍布有重特大变化时。,4.11 常见问题,4.11.1     JYQ-Ⅱ型落菌采样器经消毒杀菌后先不放进细胞培养皿，打开落菌采样器，使仪器设备中的残留消毒液挥发，時间不少于五分钟，查验总流量并依据取样量调节设置取样時间。,4.11.2     单边流无菌车间（区）或正压送风口，采样器取样口房屋朝向应正对着气旋方位，非单边流无菌车间（区），取样口往上。,4.11.3     检测时务必衣着与被测地区洁净度等级等级规定相一致并经高压灭菌后的无菌服。,4.11.4     布局取样点时，最少应尽可能绕开细颗粒物较集中化的送风口。,4.11.5     取样完毕，要用75%酒精喷射采样器外罩的内腔和轮盘（FKC型蜉蝣气体尘菌采样器喷涌取样头和维护盖）。,4.11.6     应采用一切对策避免取样全过程的环境污染和别的很有可能对样版的环境污染。,4.11.7     每次培养液应该有对比实验，检测培养液自身是不是环境污染，可每次选中3只细胞培养皿做为对比塑造；细胞培养皿在用以检验时，为防止细胞培养皿运送或挪动全过程导致的危害，宜另外开展对比实验，每一次或每一个地区取一个对比皿，与取样皿同法实际操作但不需曝露取样，随后与取样后的细胞培养皿一起放进恒温箱中塑造，結果应无菌检测落生长发育。,4.11.8     取样前要认真仔细每一个细胞培养皿的品质，如发觉霉变、损坏或环境污染的应去除。,4.11.9     因为细菌种类多种多样，区别甚大，记数时一般用散射光于于细胞培养皿反面或正脸认真观察，不必漏计细胞培养皿边沿生长发育的菌体，并须留意细菌菌落或培养液沉淀的差别，必需时要光学显微镜辨别。,4.11.10  务必按时对恒温培养箱开展校检。, 5          有关文档, 6          配件, 无, 7          变动历史时间, ,

无菌车间落菌检测规范操作流程		序号：
起草人：	审批人：	准许人：
拟定日期：	审批日期：	准许日期：
授予单位：	公布日期：	执行日期：
派发范畴：

 

1          目地

创建无菌车间落菌检测规范操作流程，标准无菌车间落菌的检验。

2          范畴

适用无菌车间（包含净化工作台）落菌的检测和自然环境认证。

3          岗位职责

QA、QC工作人员阅签。

4          內容

4.1    参照规范：GB/T 16293-2010

4.2    测试标准

本测试标准为记数浓度值法，即根据搜集飘浮在空气中的潜在性颗粒于专业的培养液（挑选能确认其可以适用微生物菌种生长发育的培养液），经多个時间和适合的生长发育标准让其繁育到由此可见的菌落计数，以判断该无菌车间的微生物菌种浓度值。

4.3    测试设备、輔助机器设备和培养液

落菌采样器、细胞培养皿（采用与仪器设备相一致的细胞培养皿）、培养液、恒温培养箱、髙压灭菌设备。

4.4    测试状态及检测時间

4.4.1   静态数据和动态性二种情况均可开展检测，静态数据检测时，房间内测试工程师不可超过两人。

4.4.2   在静态数据a检测时，单边流无菌车间（区），检测在空调净化系统软件一切正常运作時间不少于十分钟后逐渐；非单边流无菌车间（区），检测在空调净化系统软件一切正常运作不少于三十分钟后逐渐。在静态数据b检测时，单边流无菌车间（区），检测在生产制造实际操作工作人员撤出当场并历经十分钟自净作用后逐渐；非单边流无菌车间（区），检测在生产制造实际操作工作人员撤出当场并历经二十分钟自净作用后逐渐。

4.5    取样点的明确

4.5.1   至少取样点数量见表1，每一次最少取样量见表2。

表1 至少取样点数量

总面积 m2	洁净度等级等级
	A级	B级（静态数据）	B级（动态性）及C级	D级
＜10	2~3	2~3	2	2
≥10~＜20	4	4	2	2
≥20~＜40	8	8	2	2
≥40~＜100	16	16	4	2
注：针对A级单边流无菌车间（区），包含A级净化工作台，总面积指的是正压送风口面积；针对D级之上的非单边流无菌车间（区），总面积指的是屋子总面积。

 

表2 最少取样量

洁净度等级等级	取样量（L/次）
A级	1000
B级（静态数据）	1000
B级动态性及C级	500
D级	100

 

4.5.2   取样点部位布局宜务求匀称，防止取样点在部分地区过度稀少，取样点依照《洁净区环境监控管理规程》配件×××生产车间洁净度等级检测取样点布局的规定布局，每一个取样点一般取样一次。

4.5.3   工作区域取样点部位距地0.8米~1.5m上下（稍高于工作台面），正压送风口测量点部位离去排风面三十厘米上下，可在主要设备或重要工作中主题活动范畴处提升测量点。

4.6    检测提前准备

4.6.1   采样器在进到被测地区前先清理表层，随后用75%医用酒精消毒一遍或储放于被测地区内，与被检测地区一起消毒杀菌（用以A级无菌车间的采样器务必事先放到被测屋子里）。

4.6.2   A/B级区选用一次性细胞培养皿，其他地区按无菌操作原则规定，在中检室净化工作台上提早制取塑造预留（将杀菌后的培养液用水浴融解，制冷至约50-60℃，Φ90mm细胞培养皿每一个竭尽约20ml培养液，Φ150mm培每一个竭尽约30ml培养液），细胞培养皿盖上后在室内温度下发至凝结。自做好的细胞培养皿在无菌车间内储放不超过两天，2~8℃储存的细胞培养皿一般不超过1周，一次性细胞培养皿在标明的有效期限内应用，到期不可应用。

4.6.3   A/B级区应用的细胞培养皿在地区消毒杀菌前一次性传到，随自然环境一起消毒杀菌，在消毒剂拿取间铁架子上储存，在有效期限内应用。如要临时性传到，则务必在前一天臭氧杀菌前根据C级与B级不锈钢传递窗传到B级区开展臭氧杀菌，第二天应用。传到前表层也务必用75%酒精擦拭。其他地区用细胞培养皿按物件传到规定当日传到应用。

4.6.4   取样前，先用75%乙醇清理采样器的机盖、轮盘及其外罩的内外边（FKC型蜉蝣气体尘菌采样器用乙醇清理取样头）。

4.6.5   检测具体步骤见“JYQ-Ⅱ型落菌采样器规范操作流程或FKC-1型蜉蝣气体尘菌采样器规范操作流程”。

4.6.6   取样完毕后，盖上细胞培养皿外盖，在细胞培养皿上标明全部信息内容（包含产品批号，置放部位等），将细胞培养皿用适合的方法绑扎，倒放置30~35℃恒温培养箱中塑造，塑造時间不少于2天。

4.6.7   塑造完毕后逐一查验细胞培养皿，用人眼对细胞培养皿上全部的菌体立即记数、标识，随后用5~10倍高倍放大镜查验，有无忽略。若细胞培养皿上面有两个或两个之上的菌体重合，可辨别时仍以两个或两个之上菌落计数。

4.7    检测纪录应包括以下几点

4.7.1  被检测地区名字、检测日期、检测根据、检查者名字、测试设备及测试标准的叙述，检测时需选用的情况和房间内测试工程师数，取样点数量，检测频次、取样总流量，检测結果（包含全部统计分析测算材料）等。

4.7.2  若为动态性检测，还应纪录当场实际操作工作人员总数，当场机器设备运行状况等。

4.8    結果测算

4.8.1   用记数方式 得到每个细胞培养皿的菌体数。

4.8.2   每一个测量点的落菌均值浓度计算按住式开展

4.9    結果鉴定

4.9.1   每一个测量点的落菌均值浓度值务必小于所选中标准中的界线。

4.9.2   在静态数据检测时，若某测量点的落菌均值菌浓度值超出标准，则应再次取样2次，2次检测結果均达标才可以判为合乎。

4.9.3   若有超出要求者，务必立即与生产制造单位联络，对该地区开展消毒杀菌或其他解决，随后再次检测至达标。

4.10 日常监管

4.10.1  落菌日常监管设纠偏装置程度和警示程度（程度范畴及抽样次数见《洁净区环境监控管理规程》），以确保无菌车间（区）的微生物菌种浓度值遭受操纵，按时检验以查验微生物菌种负载及其消毒液的法律效力，并且做好趋向剖析。静态数据和动态性的监管都能够选用该方式 。

4.10.2  针对落菌的抽样次数，假如发生以下状况应考虑到改动，在评定下列状况后，也应明确别的新项目的检验次数

――持续超出纠偏装置程度和警示程度；

――停产時间比预估增加；

――重要地区内发觉有环境污染存有；

――在生产制造期内，空气过滤系统软件开展一切重特大的检修；

――日常操作纪录体现出倾向性的数据信息；

――消毒杀菌规程的更改；

――造成生物污染的安全事故等；

――当生产设备有重特大检修或提升机器设备时；

――当无菌室（区）构造或地区遍布有重特大变动时。

4.11 常见问题

4.11.1     JYQ-Ⅱ型落菌采样器经消毒杀菌后先不放进细胞培养皿，打开落菌采样器，使仪器设备中的残留消毒液挥发，時间不少于五分钟，查验总流量并依据取样量调节设置取样時间。

4.11.2     单边流无菌室（区）或正压送风口，采样器取样口房屋朝向应正对着气旋方位，非单边流无菌室（区），取样口往上。

4.11.3     检测时务必衣着与被测地区洁净度等级等级规定相一致并经高压灭菌后的无菌服。

4.11.4     布局取样点时，最少应尽可能绕开细颗粒物较集中化的送风口。

4.11.5     取样完毕，要用75%酒精喷射采样器外罩的内腔和轮盘（FKC型蜉蝣气体尘菌采样器喷涌取样头和维护盖）。

4.11.6     应采用一切对策避免取样全过程的环境污染和别的很有可能对样版的环境污染。

4.11.7     每次培养液应该有对比实验，检测培养液自身是不是环境污染，可每次选中3只细胞培养皿做为对比塑造；细胞培养皿在用以检验时，为防止细胞培养皿运送或挪动全过程导致的危害，宜另外开展对比实验，每一次或每一个地区取一个对比皿，与取样皿同法实际操作但不需曝露取样，随后与取样后的细胞培养皿一起放进恒温箱中塑造，結果应无菌检测落生长发育。

4.11.8     取样前要认真仔细每一个细胞培养皿的品质，如发觉霉变、损坏或环境污染的应去除。

4.11.9     因为细菌种类多种多样，区别甚大，记数时一般用散射光于于细胞培养皿反面或正脸认真观察，不必漏计细胞培养皿边沿生长发育的菌体，并须留意细菌菌落或培养液沉淀的差别，必需时要光学显微镜辨别。

4.11.10  务必按时对恒温培养箱开展校检。

5          有关文档

6          配件

无

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