无菌室限度化技术规范与施工验收规范 (含《清理室沉降菌测试限度安全操作规程》),
, 1.目地,　　本规程致力于为无菌操作原则及无菌室的爱惜出示一个限度化技术规范。, 2.可用局限性,　　生测试验室, 3.责任人,　　QC负责人生测员, 4.界说,　　无, 5.安全重视事宜,　　严苛无菌操作原则，避免微生物污染；实际操作员工进到无菌室先要关闭紫外线杀菌灯。, , 6.技术规范,　　6.1.无菌室应设立无菌操作原则间缓解冲间，无菌操作原则间洁净度应抵达10000级，室温维持在20-24℃，环境湿度维持在45-60%。超净工作台洁净度应抵达100级。,　　6.2.无菌室应保持干净，禁止堆积脏物，防止污染。,　　6.3.坚决杜绝一切杀菌器械和培育基污染，已污染者应住手应用。,　　6.4.无菌室应常备事情浓度值的消毒剂，如5％的甲酚水溶液，70％的乙醇，0.1％的新洁尔灭水溶液，这些。,　　6.5.无菌室应按时用适宜的消毒剂杀菌清理，以确保无菌室的洁净度相符合规定。,　　6.6.必须带到无菌室应用的仪器设备，器材，平皿等一切物件，均应捆扎严实，并应经过适宜的方法杀菌。,　　6.7.事情员工进到无菌室前，务必用香皂或消毒液洗手消毒杀菌，随后在缓冲间更换专用型事情服，鞋，遮阳帽，防护口罩和胶手套(或用70%的酒精再度擦洗两手)，即可进到无菌室举办实际操作。,　　6.8.无菌室应用前务必开启无菌室的紫外线杀菌灯辐照灭菌三十分钟之上，并且另外开启超净工作台举办吹风机。实际操作结束，应即时梳理无菌室，再用紫外线杀菌灯辐照灭菌二十分钟。,　　6.9.供试品在查验前，应维持外包装盒详细，不可打开，防止污染。查验前，用70％的酒精棉球消毒杀菌外外边。,　　6.10.每一次实际操作过程中，均应做阴性对照，以查验无菌操作原则的稳定性。,　　6 .11.消化吸收菌液时，务必用吸耳球消化吸收，切忌立即用口触碰塑料吸管。,　　6.12.接种针每一次应用前后左右，务必通偏执焰烧灼杀菌，待制冷后，即可打疫苗培育物。,　　6.13.含有菌液的塑料吸管，试管婴儿，培育皿等容器应泡浸在盛满5%来苏尔水溶液的消毒杀菌桶内消毒杀菌，24小时后取下清洗。,　　6.14.若有菌液洒在桌子或地面上，应立刻用5%石碳酸水溶液或3％的来苏尔坍塌在被污染处最少三十分钟，再做处理。事情衣服帽子等遭受菌液污染时，应立刻脱去，髙压蒸气杀菌后清洗。,　　6.15.凡含有活菌的物件，务必经消毒杀菌后，才华在自来水龙头下清洗，禁止污染下水管道。,　　6.16.无菌室应每月查验菌体数。在洁净事情台打开的情况下，取內径90mm的无菌检测培育皿多个，无菌操作原则区划引入溶化并制冷至约45℃的营养成分琼脂培育基约15ml，放到凝结后，倒放置30～35℃培育箱培育两天，确认无菌检测后，取平板电脑3～五个，区划置放事情部位的左中右等处，打开表盖外露三十分钟后，倒放置30～35℃培育箱培育两天，取下查验。100级清洁区平板电脑霉菌数均值不可超越一个菌体，10000级清理室均值不可超越3个菌体。如超越程度，解决无菌室举办完全消毒杀菌，直到反复查验符合规定截止。, 7.参考,　　参考《药品卫生磨练方式》 《中国药品磨练尺度操作规范》中(无菌检测检测法)章节目录 我国医疗行业限度YY/T0188.6-1995《药品磨练操作规程》, 8.派发单位,　　品质整治部,无菌室技艺具体指导表明,　　在得到了无菌检测自然环境和无菌检测材料后，大家也要维持无菌检测情况，才华对某类特殊的已经知道微生物举办科学研究或履行他们的作用，不然外部的诸多微生物非常容易渗入。外部不有关的微生物渗入的迹象，在微生物学中大家称为污染霉菌。避免污染是微生物学事情中十分重要的技艺。一方面是完全杀菌，另一方面避免污染，是无菌检测技艺的2个层面。此外，大家也要避免所科学研究的微生物，新奇是发病微生物或经过基因工程技术更新了的本来大自然不会有的微生物从大家的试验器皿中肇事逃逸到外部自然环境中去。为了更好地这种目地，在微生物学中，有很多对策。,　　无菌室内的路面、墙面务必整平，不容易藏污，以便荡涤。事情台的橱柜台面应当处在水准情况。无菌室缓解冲间都配有紫外线灭菌灯，无菌室的紫外线灭菌灯间距事情橱柜台面一米。事情员工进到无菌室应穿灭过菌的服饰，戴帽。,　　当今无菌室多存有于微生物加工厂，一样平常试验室则应用超净工作台。超净工作台其关键作用是履行气体层.流设备清理事情橱柜台面上端囊括微生物以内的诸多细微尘土。根据电动式设备使气体根据高效过滤用品后进到事情橱柜台面，使橱柜台面持续保持在流动性无菌检测气体操纵下。并且在挨近外界的一方有一道髙速流动性的气帘避免外界细菌很多气体进到。,　　在标准较难点的地区，还可以用木质无菌检测箱替代超净工作台。无菌检测箱构造朴素，以便挪动，箱正脸开有两个洞，不实际操作时要推拉门式侧门遮住，实际操作时能够将手臂塞进去。正脸上端配有夹层玻璃，以便在內部实际操作，箱內部配有紫外线灭菌灯，从侧边侧门能够装进去用品和菌苗等。,运用,无菌操作原则技艺当今不但在微生物学科学研究和运用处起着至关重要的功效，并且在很多微生物技艺中也被广泛运用。比如转基因水稻技艺、单抗技艺等。,
,
,
,
, 1 目地：建立清理室中沉降菌的测试限度安全操作规程，确保药物在划分清理等级内举办生产制造。,
2 局限性：清理室的沉降菌的检测。,
3 根据：我国限度 GB/T 16294-1996 。,
4 岗位职责： QA 洁净度检测员工、微生物磨炼员工对本规章制度的实行用心。,
5 內容
5.1清理室：对细颗粒物及微生物污染划分需举办自然环境操纵的屋子或地区。,
5.2清理事情台：一种事情台或是与这类一样一个封禁施工围挡事情区。其特性是本身可以供货经过过虑的气体或汽体，如竖直层.流清理罩、水准层流罩、竖直层.流清理事情台、水准层.流清理事情台、自净作用器等。,
5.3洁净度：清理自然环境内模块容积空气中含超过或就是某一粒度飘浮颗粒的容许统计分析数。,
5.4菌体：病菌培育后，由一个或好多个病菌滋长而产生的一病菌集落，通称CFU。一般 用数量提示。,
5.5测试方法
5.5.1方法简述：本测试方法履行地基沉降法，即根据当然地基沉降基本原理互联网在空气中的微生物颗粒于培育基平皿，经两天之上培育，在适宜的标准下让其滋长到由此可见的菌体数，来鉴定清理自然环境内的活微生物数，并为此来鉴定清理室的 洁净度。
5.5.2常用的仪器设备和武器装备
5.5.2.1髙压灭菌锅：应用时参考文档GZ-ZL-SOP-066-00举办实际操作。
5.5.2.2控温培育箱：务必按时对培育箱的温度表举办计量检定。
5.5.2.3培育皿：一样平常接受中90mm×15mm硼氯化镁夹层玻璃培育皿。应用前将培育皿放置121℃湿热灭菌二十分钟。
5.5.2.4培育基：简单营养成分琼脂培育基。将培育基加温熔融，制冷至约45℃在无菌操作原则条
件下将培育基引入培育皿，每皿约15m1。待琼脂培育基凝结后，将培育基平皿放进30～35℃控温培育箱中培育数钟头，若培育基平皿上确实没有菌体生长发育，就可以供取样用，制取好的培育基平皿应在2～8℃的自然环境中储放。
5.5.3测试流程
5.5.3.1取样方法：将已制取好的培育皿置放在预先确定的抽样点，开启培育皿盖，使培育基外边外露0.5钟头，再将培育皿盖上盖后颠倒。
5.5.3.2培育：全部取样竣事，将培育皿倒放置控温培育箱中培育。在30～35℃培育，時间不少于两天。每次培育基应该有对比实验，查验培育基自身是不是污染，可每次选中3只培育皿作对比培育。
5.5.3.3菌落计数：用人眼立即记数，随后用5～10倍高倍放大镜查验，有无忽略。若培育皿上面有两个或两个之上菌体重合，可辨别时仍以两个或两个之上的菌落计数。,
5.6重视事宜
4.6.1测试用品要做杀菌处理，以保证 测试的稳定性、精确性。
5.6.2接受一切对策避免人为因素对样版的污染。
5.6.3对培育基、培育标准以及他主要参数作详尽的记录。
5.6.4因为细菌种类多种多样，差别甚大，记数时一样平常用散射光于培育皿之后或正脸细心调查，不必漏计培育皿边沿生长发育的菌体，并须重视细菌菌落与培育基沉淀的差别，必须时要光学显微镜辨别。
5.6.5取样前要认真仔细每一个培育皿的品质，如发觉霉变、损坏或污染的应去除。,
5.7测试标准
5.7.1测试情况
5.7.1.1沉降菌测试前：被测试清理室（区）的温度湿度须抵达划分的规定，负压差、务必操纵在划分值内。被测试清理室（区）已消毒。
5.7.1.2测试情况有静态数据和动态性二种，并在叙述中标明测试情况。
5.7.1.3测试员工：测试员工务必衣着相符合自然环境洁净度级其他事情服。静态数据测试时，房间内测试员工不可超过2自我个人。
5.7.2测试時间
5.7.2.1对单边流，如100级净化处理屋子里及层.流事情台，测试应在空调净化系统软件一切正常运作不少于十分钟后最开始。
5.7.2.2对非单边流，如10000级、100000级之上的净化处理屋子，测试应在空调净化系统软件一切正常运作不少于三十分钟最开始。,
5.8沉降菌记数
5.8.1至少取样点数量：可按表1明确。在满足至少测等级的另外，还宜满足至少培育皿数，见表2。
表1至少取样点数量
总面积(m2)           洁净度等级
            100  10000  100000  300000
＜10        2～3  2      2     2
≥10～＜20  4     2      2     2
≥20～＜40  8     2      2     2
≥40～＜100  16    4      2     2
≥100～＜200  40   10     3     3
注：表格中的总面积针对单边流清理室就是指排风总面积，针对非单边流清理室就是指屋子总面积。
表2至少培养皿数
洁净度等级 所需Φ90mm培养皿数（以地基沉降0.5钟头计）
  100             14
  10000            2
  100000           2
  300000           2
5.8.2取样点的布署：事儿区测试用例部位距地0.8～1.5m上下（稍高于事人情世故）。可在重要武器装备或重要事儿流动性局限性处增加测量点，取样点的布署应争取均值，阻拦取样点在某 部分地区过度集中化，某部分地区过度希奇。
5.8.3记录：检测叙述中应记录屋子溫度、空气湿度、压力差、测试状态及数据测试。
5.8.4实际效果筹算：用记数方法得到每个培养皿的菌体数。均值菌体数的筹算见上式：
m1 m2 …… mn
均值菌体数m=n
式中：m为均值菌体数；m1为2号培养皿菌体数；m2为2号培养皿菌体数；mn为n号培养皿菌体数；n为培养皿数量。
5.8.5实际效果鉴定：用均值菌体数分辨清理室的空气中的微生物菌种。
5.8.6清理室（区）内的均值菌体数务必小于所选中的鉴定限度（见表3）。
5.8.7若某清理室（区）的均值菌体数超越鉴定限度，则务必对于此事地区优先消毒杀菌，随后再次检测2次，检测实际效果务必合格。
表3 
清理等级     100级   10000级   100000级   300000级
限度（均值）  一个/皿  3个/皿    10个/皿    15个/皿,
, 无菌车间限度化技术规范与施工验收规范 (含《清洁室沉降菌测试尺度操作规程》),

无菌车间限度化技术规范与施工验收规范(含《清洁室沉降菌测试尺度操作规程》)

1.目地

　　本规程致力于为无菌操作原则及无菌车间的爱惜出示一个限度化技术规范。

2.可用局限性

　　生测试验室

3.责任人

　　QC负责人生测员

4.界说

　　无

5.安全重视事宜

　　严苛无菌操作原则，避免微生物菌种环境污染；实际操作员工进到无菌车间先要关闭紫外线杀菌灯。

6.技术规范

　　6.1.无菌车间应设立无菌操作原则间缓解冲间，无菌操作原则间洁净度应抵达10000级，室温维持在20-24℃，环境湿度维持在45-60%。超净工作台洁净度应抵达100级。

　　6.2.无菌车间应保持干净，禁止堆积脏物，防止环境污染。

　　6.3.坚决杜绝一切杀菌器械和培养基环境污染，已污染者应住手应用。

　　6.4.无菌车间应常备事儿浓度值的消毒剂，如5％的甲酚水溶液，70％的乙醇，0.1％的新洁尔灭水溶液，这些。

　　6.5.无菌车间应按时用适宜的消毒剂杀菌清理，以确保无菌车间的洁净度相符合规定。

　　6.6.必须带到无菌车间应用的仪器设备，器材，平皿等一切物件，均应捆扎严实，并应经过适宜的方法杀菌。

　　6.7.事儿员工进到无菌车间前，务必用香皂或消毒液洗手消毒杀菌，随后在缓冲间更换专用型事儿服，鞋，遮阳帽，防护口罩和胶手套(或用70%的酒精再度擦洗两手)，即可进到无菌车间举办实际操作。

　　6.8.无菌车间应用前务必开启无菌车间的紫外线杀菌灯辐照灭菌三十分钟之上，并且另外开启超净工作台举办吹风机。实际操作结束，应即时梳理无菌车间，再用紫外线杀菌灯辐照灭菌二十分钟。

　　6.9.供试品在查验前，应维持外包装盒详细，不可打开，防止环境污染。查验前，用70％的酒精棉球消毒杀菌外外边。

　　6.10.每一次实际操作过程中，均应做阴性对照，以查验无菌操作原则的稳定性。

　　6 .11.消化吸收菌液时，务必用吸耳球消化吸收，切忌立即用口触碰塑料吸管。

　　6.12.接种针每一次应用前后左右，务必通偏执焰烧灼杀菌，待制冷后，即可打疫苗培养物。

　　6.13.含有菌液的塑料吸管，试管婴儿，培养皿等容器应泡浸在盛满5%来苏尔水溶液的消毒杀菌桶内消毒杀菌，24小时后取下清洗。

　　6.14.若有菌液洒在桌子或地面上，应立刻用5%石碳酸水溶液或3％的来苏尔坍塌在被环境污染处最少三十分钟，再做处理。事儿衣服帽子等遭受菌液环境污染时，应立刻脱去，髙压蒸气杀菌后清洗。

　　6.15.凡含有活菌的物件，务必经消毒杀菌后，才华在自来水龙头下清洗，禁止环境污染下水管道。

　　6.16.无菌车间应每月查验菌体数。在洁净事儿台打开的情况下，取內径90mm的无菌检测培养皿多个，无菌操作原则区划引入溶化并制冷至约45℃的营养成分琼脂培养基约15ml，放到凝结后，倒放置30～35℃培养箱培养两天，确认无菌检测后，取平板电脑3～五个，区划置放事儿部位的左中右等处，打开表盖外露三十分钟后，倒放置30～35℃培养箱培养两天，取下查验。100级清洁区平板电脑霉菌数均值不可超越一个菌体，10000级清理室均值不可超越3个菌体。如超越程度，解决无菌车间举办完全消毒杀菌，直到反复查验符合规定截止。

7.参考

　　参考《药品卫生磨练方式》 《中国药品磨练尺度操作规范》中(无菌检测检测法)章节目录 我国医疗行业限度YY/T0188.6-1995《药品磨练操作规程》

8.派发单位

　　品质整治部

无菌车间技艺具体指导表明

　　在得到了无菌检测自然环境和无菌检测材料后，大家也要维持无菌检测情况，才华对某类特殊的已经知道微生物菌种举办科学研究或履行他们的作用，不然外部的诸多微生物菌种非常容易渗入。外部不有关的微生物菌种渗入的迹象，在分子生物学中大家称为环境污染霉菌。避免环境污染是分子生物学事儿中十分重要的技艺。一方面是完全杀菌，另一方面避免环境污染，是无菌检测技艺的2个层面。此外，大家也要避免所科学研究的微生物菌种，新奇是发病微生物菌种或经过基因工程技术更新了的本来大自然不会有的微生物菌种从大家的试验器皿中肇事逃逸到外部自然环境中去。为了更好地这种目地，在分子生物学中，有很多对策。

　　无菌车间内的路面、墙面务必整平，不容易藏污，以便荡涤。事儿台的橱柜台面应当处在水准情况。无菌车间缓解冲间都配有紫外线灭菌灯，无菌车间的紫外线灭菌灯间距事儿橱柜台面一米。事儿员工进到无菌车间应穿灭过菌的服饰，戴帽。

　　当今无菌车间多存有于微生物菌种加工厂，一样平常试验室则应用超净工作台。超净工作台其关键作用是履行气体层.流设备清理事儿橱柜台面上端囊括微生物菌种以内的诸多细微尘土。根据电动式设备使气体根据高效过滤用品后进到事儿橱柜台面，使橱柜台面持续保持在流动性无菌检测气体操纵下。并且在挨近外界的一方有一道髙速流动性的气帘避免外界细菌很多气体进到。

　　在标准较难点的地区，还可以用木质无菌检测箱替代超净工作台。无菌检测箱构造朴素，以便挪动，箱正脸开有两个洞，不实际操作时要推拉门式侧门遮住，实际操作时能够将手臂塞进去。正脸上端配有夹层玻璃，以便在內部实际操作，箱內部配有紫外线灭菌灯，从侧边侧门能够装进去用品和菌苗等。

运用

无菌操作原则技艺当今不但在分子生物学科学研究和运用处起着至关重要的功效，并且在很多微生物技艺中也被广泛运用。比如转基因水稻技艺、单抗技艺等。

清理室沉降菌检测限度安全操作规程

1目地：建立清理室中沉降菌的检测限度安全操作规程，确保药物在划分清理等级内举办生产制造。

2局限性：清理室的沉降菌的检测。

3根据：我国限度GB/T 16294-1996。

4岗位职责：QA洁净度检测员工、微生物菌种磨炼员工对本规章制度的实行用心。

5內容
5.1清理室：对细颗粒物及微生物菌种环境污染划分需举办自然环境操纵的屋子或地区。

5.2清理事情台：一种事情台或是与这类一样一个封禁施工围挡事情区。其特性是本身可以供货经过过虑的气体或汽体，如竖直层.流清理罩、水准层流罩、竖直层.流清理事情台、水准层.流清理事情台、自净作用器等。

5.3洁净度：清理自然环境内模块容积空气中含超过或就是某一粒度飘浮颗粒的容许统计分析数。

5.4菌体：病菌培育后，由一个或好多个病菌滋长而产生的一病菌集落，通称CFU。一般 用数量提示。

5.5测试方法
5.5.1方法简述：本测试方法履行地基沉降法，即根据当然地基沉降基本原理互联网在空气中的微生物颗粒于培育基平皿，经两天之上培育，在适宜的标准下让其滋长到由此可见的菌体数，来鉴定清理自然环境内的活微生物菌种数，并为此来鉴定清理室的洁净度。
5.5.2常用的仪器设备和武器装备
5.5.2.1髙压灭菌锅：应用时参考文档GZ-ZL-SOP-066-00举办实际操作。
5.5.2.2控温培育箱：务必按时对培育箱的温度表举办计量检定。
5.5.2.3培育皿：一样平常接受中90mm×15mm硼氯化镁夹层玻璃培育皿。应用前将培育皿放置121℃湿热灭菌二十分钟。
5.5.2.4培育基：简单营养成分琼脂培育基。将培育基加温熔融，制冷至约45℃在无菌操作原则条
件下将培育基引入培育皿，每皿约15m1。待琼脂培育基凝结后，将培育基平皿放进30～35℃控温培育箱中培育数钟头，若培育基平皿上确实没有菌体生长发育，就可以供采样用，制取好的培育基平皿应在2～8℃的自然环境中储放。
5.5.3测试流程
5.5.3.1采样方法：将已制取好的培育皿置放在预先确定的抽样点，开启培育皿盖，使培育基外边外露0.5钟头，再将培育皿盖上盖后颠倒。
5.5.3.2培育：全部采样竣事，将培育皿倒放置控温培育箱中培育。在30～35℃培育，時间不少于两天。每次培育基应该有对比实验，查验培育基自身是不是环境污染，可每次选中3只培育皿作对比培育。
5.5.3.3菌落计数：用人眼立即记数，随后用5～10倍高倍放大镜查验，有无忽略。若培育皿上面有两个或两个之上菌体重合，可辨别时仍以两个或两个之上的菌落计数。

5.6重视事宜
4.6.1测试用品要做杀菌处理，以保证 测试的稳定性、精确性。
5.6.2接受一切对策避免人为因素对样版的环境污染。
5.6.3对培育基、培育标准以及他主要参数作详尽的记录。
5.6.4因为细菌种类多种多样，差别甚大，记数时一样平常用散射光于培育皿之后或正脸细心调查，不必漏计培育皿边沿生长发育的菌体，并须重视细菌菌落与培育基沉淀的差别，必须时要光学显微镜辨别。
5.6.5采样前要认真仔细每一个培育皿的品质，如发觉霉变、损坏或环境污染的应去除。

5.7测试标准
5.7.1测试情况
5.7.1.1沉降菌测试前：被测试清理室（区）的温度湿度须抵达划分的规定，负压差、务必操纵在划分值内。被测试清理室（区）已消毒。
5.7.1.2测试情况有静态数据和动态性二种，并在叙述中标明测试情况。
5.7.1.3测试员工：测试员工务必衣着相符合自然环境洁净度级其他事情服。静态数据测试时，房间内测试员工不可超过2自我个人。
5.7.2测试時间
5.7.2.1对单边流，如100级净化处理屋子里及层.流事情台，测试应在空调净化系统软件一切正常运作不少于十分钟后最开始。
5.7.2.2对非单边流，如10000级、100000级之上的净化处理屋子，测试应在空调净化系统软件一切正常运作不少于三十分钟最开始。

5.8沉降菌记数
5.8.1至少采样点数量：可按表1明确。在满足至少测等级的另外，还宜满足至少培育皿数，见表2。
表1至少采样点数量
总面积(m2)           洁净度等级
            100  10000  100000  300000
＜10        2～3  2      2     2
≥10～＜20  4     2      2     2
≥20～＜40  8     2      2     2
≥40～＜100  16    4      2     2
≥100～＜200  40   10     3     3
注：表格中的总面积针对单边流清理室就是指排风总面积，针对非单边流清理室就是指屋子总面积。
表2至少培育皿数
洁净度等级 所需Φ90mm培育皿数（以地基沉降0.5钟头计）
  100             14
  10000            2
  100000           2
  300000           2
5.8.2采样点的布署：事情区测试点部位距地0.8～1.5m上下（稍高于事人情世故）。可在重要武器装备或重要事情流动性局限性处增加测量点，采样点的布署应争取均值，阻拦采样点在某 部分地区过度集中化，某部分地区过度希奇。
5.8.3记录：测试叙述中应记录屋子溫度、空气湿度、压力差、测试情况及测试数据信息。
5.8.4实际效果筹算：用记数方法得到每个培育皿的菌体数。均值菌体数的筹算见上式：
m1 m2 …… mn
均值菌体数m=n
式中：m为均值菌体数；m1为2号培育皿菌体数；m2为2号培育皿菌体数；mn为n号培育皿菌体数；n为培育皿数量。
5.8.5实际效果鉴定：用均值菌体数分辨清理室的空气中的微生物菌种。
5.8.6清理室（区）内的均值菌体数务必小于所选中的鉴定限度（见表3）。
5.8.7若某清理室（区）的均值菌体数超越鉴定限度，则务必对于此事地区优先消毒杀菌，随后再次测试2次，测试实际效果务必合格。
表3 
清理等级     100级   10000级   100000级   300000级
限度（均值）  一个/皿  3个/皿    10个/皿    15个/皿

关键论文参考文献：我国限度GB/T 16294-1996