医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法(GB/T，162

洁净室施工及验收规范JGJ71-90(全文完整版)

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中华人民共和国国家标准GB/T16294—2010取代GB/T16294—196，医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法，Tstmethodforsetlingmicrobein为cleanromm(zone)提供授权，这个标准参考了ISO计算机14698-1《洁净室和相关环境控制第一部分:微生物控制》、ISO计算机113-10-10-10-10-10-10-10-10-10-100-1-101-101-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1本标准代替GB/T16294-1996《医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法》.

本标准与GB/T6294-1996的主要区别在于，-增加了确定最低采样点数的方法——修改了原标准的4.8.3.2，改为4.10.2采用大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)制作的培养盘采样后，在30℃~35℃的培养箱中培养，时间在2d以上，沙氏培养基(SDA)制作的培养盘采样后，在20℃~25℃的培养箱中培养，时间在5d以上.

——本标准增加了5.

8日常监视的内容，增加了洁净室(区)空气微生物浓度控制的偏差限度和警戒限度的设定和取样频率的确定.

本标准的附录a、附录b是规范的附录.

本标准的附录c是资料附录.

本标准由国家食品药品监督管理局提出归口.

本标准起草机构:上海市食品药品包装材料检测所、中国食品药品检测研究院医疗器械检测中心.

本标准主要起草人:陆维怡、徐敏凤、冯晓明、王志敏.

本标准代替标准的历次标本的发表状况为GB/T带16294-1996.

本标准规定了医药工业洁净室和洁净区沉降菌的测试条件、测试方法.

本标准适用于医药工业清洁室和清洁区、无菌室或局部空气净化区(包括清洁工作台)沉降菌的测试和环境验证.

下列文件中的条款通过本标准的引用成为本标准的条款.

注意日期的引用文件，之后所有的修正文件(不包括错误的内容)和修正版都不适用于本标准，但鼓励根据本标准达成协议的各方研究能否使用该文件的最新版本.

不注意日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.

GB/T16292-2010医药工业洁净室(区)悬浮粒子的测试方法，以下用语和定义适用于本标准.3.1沉降菌settlingmicrobe用本标准提到的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专业的培养基，在适当的生长条件下繁殖到可见的菌落数.3.2沉降菌落数settling，microbeplatecount，规定时间内各平板培养盘收集空气中沉降菌的数量，用一个/容器表示.

本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子培育基平盘，经过一些时间，在适当的条件下将可见的菌落繁殖计数，用平板培育盘中的菌落数判定清洁环境中的活微生物数，评定清洁室(区)的清洁度.

洁净室(区)的测试人员进行本专业培训，取得相应资格后，履行洁净室(区)测试的责任，包括卫生知识和基本微生物知识.

洁净室(区)的测试人员必须选择适合生产操作的空气洁净度水平的穿着方式，外面的衣服不能带到10000级以上的区域.

仪器应包括:，a)培养盘，b)培养基(见本标准附录b)，c)恒温培养箱，d)高压蒸汽灭菌器.4.3.1培养盘，一般采用φ90mm×15mm规格的培养盘.4.3.2培养基、大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)、沙氏培养基(SDA)或其他用户认可经验证的培养基.

其配制方法见附录b.4.3.3恒温培养箱必须定期检查恒温培养箱.4.4.1测试前培养基础表面必须严格消毒.4.4.2将制备的培养盘按采样点配置图逐一配置，从内到外打开培养盘盖，使培养基的表面暴露在空气中.4.4.3静态测试时，培养盘暴露时间在30min以上的动态测试时，培养盘暴露时间在4h以下.4.4.4全部采样结束后，将培养盘倒置恒温培养箱进行培养.4.4.5采用大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)制作的培养盘采样后，在30℃~35℃的培养箱中培养，采用时间在2d以上的砂氏培养基(SDA)制作的培养基采样后，在20℃~25℃的培养箱中培养，时间在5d以上.4.4.6各培养基础应进行比较试验，检查培养基本上是否污染.

每批可以选择三个培养盘进行比较培养.4.5.1用肉眼直接计数培养盘上的所有菌落、标记或在菌落计数器上点数，然后用5~10倍的放大镜检查是否泄漏.4.5.2如果平板上有两个或两个以上的菌落重叠，则可以区分为两个或两个以上的菌落.4.6.1测试用具应进行灭菌处理，以确保测试的可靠性和准确性.4.6.2采取一切措施防止样品污染.4.6.3详细记录培养基础、培养条件和其他参数.4.6.4细菌种类繁多，差异很大，计数时一般用透射光仔细观察盘子的背面和正面，不要错过盘子边缘生长的菌落，要注意细菌落和培养基沉淀物的差异，必要时用显微镜鉴别.4.6.5采样前，应仔细检查各培养盘的质量，发现变质、破损或污染时应清除.

在测试之前，必须事先测试洁净室(区)的相关参数.

这样的测试提供测试沉降菌的环境条件.

例如，这个事前测试可以包括:，a)温度和相对湿度的测试.

洁净室(区)的温度和相对湿度应符合其生产和技术要求(如果没有特殊要求，温度应为18℃~26℃，相对湿度应为45%~65%).

同时，应满足测试仪器的使用范围，b)室内送风量或风速测试或压差测试，c)高效过滤器泄漏测试.

静态和动态两种状态都可以测试.

静态测试时，室内测试人员不得超过2人.

沉降菌测试前，被测量的洁净室(区)由用户决定是否需要事先消毒.

在测试报告书中，必须注明测试时采用的状态和室内测试人数.5.3.1在空态或静态a测试中，对于单向流洁净室(区)，净化空调系统的正常运行时间应在10分钟以上开始.

洁净室换气次数尺度

洁净室换气次数标准

对于非单向流净化室(区)，测试应在净化空调系统的正常运行时间不少于30分钟后开始.

静态b测试时，对于单向流动洁净室(区)，测试应在生产作业人员撤离现场，10分钟后开始，对于非单向流动洁净室(区)，测试应在生产作业人员撤离现场，20分钟后开始.

(原文链接:http://www.

whwccj.

com/a-63/)，5.3.2动态测试时，必须记录生产开始时间和测试时间.5.4.1采样点数及其配置，5.4.1.1最低采样点数，沉降菌测试最低采样点数可参考GB/T小姐16292-2010.5.4.1.2采样点位置、沉降菌采样点位置可参考GB/Ttte16292-2010.

a)工作区采样点位置离地面0.8m~1.5m左右(略高于工作面)，b)可在重要设备和重要工作范围内增加测量点.

采样点配置的规则见附录a.5.4.2最低培养盘数，在满足最低采样点数的同时，也应满足最低培养盘数，看表1.

表1最少培养盘数，5.4.3采样次数，各采样点一般采样一次.5.4.4采样注意事项，5.4.4.1对于单向流动洁净室(区)或送风口，采样器采样口朝向应对气流方向的非单向流动洁净室(区)采样口朝上.5.4.4.2配置采样点时，至少要避免灰尘粒子集中的回风口.5.4.4.3采样时，测试人员应站在采样口下风侧，尽量少走路.5.4.4.4应采取一切措施防止样品过程中的污染和其他可能对样品的污染.5.4.4.5培养盘用于检查时，为了避免培养盘运输和移动过程的影响，应同时进行比较试验，每次或每个地区取一个比较盘，与采样盘同法操作，但无需暴露采样，与采样后的培养盘(TSA或SDA)一起放入培养箱培养，结果无菌生长.

，测试报告应包括以下内容:，a)测试人员的名称和地址，测试日期.

，b)测试依据.

，c)被测试洁净室(区域)的平面位置(必要时标记相邻区域的平面位置).

d)相关测试仪器及其测试方法的描述:包括测试环境条件、取样点数量和布局图、测试次数或可能存在的测试方法的变更、测试仪器的测试证书等.

如果是动态测试，还应记录现场操作人员的数量和位置，现场设备的运行数量和位置.

e)测试结果包括所有统计数据.5.6.1用计数方法得出各培养盘的菌落数.5.6.2各测量点沉降菌平均菌落数的计算，见式(1).

、5.7.1各测定点的沉降菌平均菌落数必须低于选定评定标准的界限.5.7.2静态测试时，某测试点的沉降菌平均菌落数超过评定标准时，必须重新采样2次，2次测试结果合格后才能判断合格.

对于沉降菌的监视，为了控制洁净室(区)的微生物浓度，必须设定偏差限度和警戒限度.

定期检查微生物负荷和消毒剂的效力，进行趋势分析.

无论是静态还是动态以采用这种方法.

对于沉降菌的采样频率，如果发生以下情况，必须考虑修正.

评价以下情况后，必须确定其他项目的检查频率.

——连续超过纠正限度和警戒限度——停止时间比预想的要长——在重要区域内发现有污染的生产期间，空气净化系统进行了重大的修理——日常的操作记录反映了倾向性的数据——消毒规程的变化——生物污染的事故等，生产设备有重大的修理和增加设备的情况下，清洁室(区域)的构造和区域有重大变动的情况下.，A.l洁净室(区)采样点的配置应尽量均匀，以免采样点在局部区域过于稀疏.

以下多点采样点布局图可供参考(见图A.1).洁净室平面采样点配置图“/>、图A.

1平面采样点配置图、a.

2-100级单向流区、洁净工作台或局部空气净化设施采样点配置在正对气流方向的工作面上，气流形式可参考图A.2、图A.3.清洁现场气流形式图“t/>、h、b.

1芝士蛋白琼脂培养基(TSA)培养基的灭菌和准备，B.1.1培养基采用芝士蛋白琼脂培养基，可以用以下处方制作，也可以用该处方生产的满足要求的脱水培养基.

配制后，根据培养基规定的经验证合格的灭菌程序进行灭菌.B.1.2豆酪蛋白琼脂培养基配方、酪蛋白胰酶消化物……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………盖上后，在室温下凝固.，B.2沙氏琼脂培养基(SDA)培养基的灭菌和准备，红糖……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………盖上后，在室温下凝固.，B.3培养基平盘的培养和保存，准备好的培养基平盘应在2℃~8℃保存，一般按一周或厂家提供的标准执行.

采用适当的方法在平盘上制作培养基的名称、制作日期记录的标记.

注1):采用其他规格的平盘，可适当增减培养基的量，在平盘中至少形成2mm厚的琼脂层.

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