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微信公众号：武汉得创净化设备有限公司
发布时间：2021-03-28 23:09 人气： 来源：http://www.whwccj.com
,
A．
3
物件表层微生物菌种环境污染查验方式
,
A．
3.1
取样時间
,
潜在污染区、污染消毒杀菌后取样。清洁区依据当场状况明确。
,
A．
3.2
取样总面积
,
被采表层
<100 cm2
，取所有表层；被采表层≥
100 cm2
，取
100 cm
2
。
,
A．
3.3
取样方式
,
用
5 cm
×
5 cm
杀菌规格型号板放到被检物件表层，用浸有无菌检测
0.03 mol
／
L
聚磷酸盐缓冲溶液或盐水取样液的棉拭子
1
支，在规格型号板内横纵来回各擦抹
5
次，并随着旋转棉拭子，持续取样
1
～
4
个规格型号板总面积，剪去手触碰一部分，将棉拭子放进配有
10 mL
取样液的试管婴儿中复检。门拉手等中小型物件则选用棉拭子立即擦抹物件取样。若取样物件表层有消毒液残余时，取样液应含相对还原剂。
,
A．
3.4
检验方式
,
把取样管充足震荡后，取不一样稀释倍数的过柱液
1.0 mL
打疫苗平皿，将冷至
40
℃～
45
℃的熔融营养成分琼脂培养液每皿竭尽
15 mL
～
20 mL
，
36
℃±
1
℃恒温箱塑造
48 h
，记数菌体数，必需时分离出来高致病微生物菌种。
,
A．
3.5
結果测算
[
如式
(A
．
2)]
,
,
A.4 医护人员手卫生查验方式
,
A.4.1 取样時间
,
采用手卫生后，在触碰患者或从业诊疗主题活动前取样。
,
A.4.2 取样方式
,
将浸有无菌检测
0.03 mol
／
L
聚磷酸盐缓冲溶液或盐水取样液的棉拭子一支在两手指斜面从指跟得指端往返涂擦各2次（一只手涂擦总面积约
30 cm
2
），并随着旋转取样棉拭子，剪去手触碰位置，将棉拭子放进配有
10 mL
取样液的试管婴儿内复检。取样总面积按立方厘米
(cm
2
)
测算。若取样时手里有消毒液残余，取样液应含相对还原剂。
,
A.4.3 检验方式
,
把取样管充足震荡后，取不一样稀释倍数的过柱液
1
．
O mL
打疫苗平皿，将冷至
40
℃～
45
℃的熔融营养成分琼脂培养液每皿竭尽
15 mL
～
20 mL
，
36
℃±
1
℃恒温箱塑造
48 h
，记数菌体数，必需时分离出来高致病微生物菌种。
,
A．
4.4
結果测算
[
如式
(A
．
3)]
,
,
A．
5
医疗器械查验方式
,
A．
5.1
取样時间
,
在消毒杀菌或杀菌解决后，储放有效期限内取样。
,
A.5.2 杀菌医疗器械的查验方式
,
A．
5.2.1
能用毁灭性方式抽样的，如一次性打点滴（血）器、注射针和注射器等依照《中华人民共和国药典》中“无菌检测检测法”开展。对不能用毁灭性方式抽样的医疗器械，应在自然环境洁净度等级
10 000
级下的部分洁净度等级
100
级的单边流气体地区内或防护系统软件中，用浸有无菌检测盐水取样液的棉拭子在被检物件表层擦抹，取样取所有表层或不少于
100 cm
2
；随后将去除手触碰一部分的棉拭子开展无菌检测查验。
,
A．
5.2.2
牙科手机：应在自然环境洁净度等级
10 000
级下的部分洁净度等级
100
级的单边流气体地区内或防护系统软件中，将每一个手机上各自放置含
20 mL
～
25 mL
取样液的无菌检测大试管婴儿
(
內径
25 mm)
中，液位高宽比应超过
4.0 cm
，于旋涡混合器上清洗波动
30 s
之上，取过柱液开展无菌检测查验。
,
A.5.3 消毒杀菌医疗器械的查验方式
,
A．
5.3.1
可整个放进无菌检测试管婴儿的，用过柱液浸入后波动
30 s
之上，取过柱液
1
．
O mL
打疫苗平皿，将冷至
40
℃～
45
℃的熔融营养成分琼脂培养液每皿竭尽
15 mL
～
20 mL
，
36
℃±
1
℃恒温箱塑造
48 h
，记数菌体数
(CFU/
件
)
，必需时分离出来高致病微生物菌种。
,
A．
5.3.2
能用毁灭性方式抽样的，在
100
级净化工作台称量
1 g
―
lo g
试品，放进配有
10 mL
取样液的试管婴儿内开展过柱，取过柱液
1
．
O mL
打疫苗平皿，记数菌体数
(CFU/g)
，必需时分离出来高致病微生物菌种。对不能用毁灭性方式抽样的医疗器械，在
100
级净化工作台，用浸有无菌检测盐水采样液的棉拭子在被检物件表面擦抹采样，被采表面
<100 cm
2
，取所有表面，被采表面≥
100 cm
2
，取
100 cm
2
，随后将去除手触碰一部分的棉拭子开展过柱，取过柱液
1
．0
mL
打疫苗平皿，将冷至
40
℃～
45
℃的熔融营养成分琼脂培养液每皿竭尽
15 mL
～
20 mL
，
36
℃±
1
℃恒温箱塑造
48 h
，记数菌体数
(CFU/cm
2
)
，必需时分离出来高致病微生物菌种。
,
A．
5.3.3
消毒杀菌后内窥镜：取清理消毒杀菌后内窥镜，选用无菌检测注射针提取
50 mL
含相对还原剂的过柱液，从穿刺活检口引入清洗内窥镜管道，并全量搜集（可应用隔膜泵）复检。将过柱液充足搅拌，取过柱液
1.0 mL
打疫苗平皿，将冷至
40
℃～
45
℃的熔融营养成分琼脂培养液每皿竭尽
15 mL
～
20 mL
，
36
℃±
1
℃恒温箱塑造
48 h
，记数菌体数
(CFU/
件
)
。将剩下过柱液在无菌检测标准下选用滤纸
(0. 45
μ
m)
过虑浓缩，将滤纸打疫苗于凝结的营养成分琼脂平板电脑上（留意不必造成汽泡），置
36
℃±
1
℃温箱塑造
48 h
，记数菌体数。
,
当滤膜法不计其数时：
,
菌落总数（
CFU/
件）
=m(CFU/
平板电脑
)
×
50
……
(A
．
4)
,
式中：
,
m-两平行面平板电脑的均值菌体数。
,
当滤膜法可计数时：
,
菌落总数（
CFU/
件）
=m(CFU/
平板电脑
) mf
（
CFU/
滤纸） …………
(A
．
5)
,
式中：
,
m-两平行面平板电脑的均值菌体数；
,
mf -滤纸上菌体数。
,
A.6 消毒液查验方式
,
A.6.1 消毒液取样
,
取样分库存量消毒液和应用中消毒剂。
,
A．
6.2
消毒液成分成分查验方式
,
库存量消毒液的成分成分应按照《消毒技术规范》或商品产品标准开展检验；应用中消毒剂的合理浓度值测量能用上述情况方式，也可应用经国卫行政机关准许的消毒液浓度值测纸（卡）开展检测。
,
A．
6.3
应用中消毒剂染菌量查验方式
,
A．
6.3.1
用无菌检测塑料吸管按无菌操作原则方式汲取
1.0 mL
被检消毒剂，添加
9 mL
还原剂中搅拌。醛类与酚类消毒剂用一般营养成分骨头汤中合，含氯消毒剂、含碘消毒液和氯丁二烯消毒液用含
0.1%
硫代硫酸钠还原剂，洗必泰、季铵盐类消毒液用含
0.3%
吐温
80
和0.3
%
大豆卵磷脂还原剂，代烃消毒液用含
0.3%
甘氨酸中和剂，带有表活剂的各种各样棘籽消毒剂可在中和剂中添加吐温
80
至
3%;
也可应用该消毒剂消毒杀菌实际效果检验的中和剂评定实验明确的中和剂。
,
A．
6.3.2
用无菌检测塑料吸管汲取一定稀释液占比的中合后溶液
1.0 mL
打疫苗平皿，将冷至
40
℃～
45
℃的熔融营养成分琼脂培养液每皿竭尽
15 mL
～
20 mL
，
36
℃±
1
℃恒温箱塑造
72 h
，记数菌体数；必需时分离出来高致病微生物菌种。,
消毒剂染菌量
(CFU
／
mL)=
均值每皿菌体数×
10
×稀释倍数 …………
(A
．
6),
A．
7
医治自来水查验方式
,
血透有关医治自来水按
YY 0572
开展检验。别的医治自来水依照有关规范实行。
,
A．
8
紫外线灭菌灯查验方式
,
A．
8.1
紫外线灭菌灯取样
,
取样分库存量紫外线灭菌灯和应用中紫外线灭菌灯。
,
A．
8.2
库存量（新开启）紫外线灭菌灯辐射源光照强度值查验方式
,
依照
GB 19258
开展。
,
A．
8.3
应用中紫外线灭菌灯辐射源光照强度值查验方式
,
A．
8.3.1
仪器设备法。打开紫外线灭菌灯
5 min
后，将测量光波长为
253.7 nm
的紫外光辐照度计摄像头放置被检紫外线灭菌灯下安全距离
1米
的中间处，待仪表平稳后，所示数据信息即是该紫外线灯的辐射源照度值。
,
A．
8.3.2
标示卡法。打开紫外线灯
5 min
后，将标示卡置紫外线杀菌灯下安全距离
1米
处，有图案设计一面朝上，直射
1 min
，观查标示卡图形的色调，将其与规范图形较为。
,
A．
8.4
常见问题
,
紫外光辐照度计应在计量检定单位计量检定的有效期限内应用；紫外光检测标示卡应获得国卫行政机关的批准批文，并在商品有效期限内应用。
,
A．
9
消毒器械查验方式
,
A．
9.1
除菌因素抗压强度测量：按《消毒技术规范》或公司标准的方式开展检验。
,
A．
9.2
办公环境有害物质浓度值（抗压强度）测量：按《消毒技术规范》或有关标准的方式开展检验。
,
A．
10
医院污水查验方式
,
按
GB 18466
要求开展检验。
,
A. 11 疫点（区）消毒杀菌实际效果检验方式
,
按
GB 19193
要求开展检验。
,
A．
12
大肠杆菌查验方式
,
依照
GB 4789.3
开展检验。
,
A．
13
沙门茵查验方式
,
依照
GB 4789.4
开展检验。
,
A. 14 乙型肝炎血溶链球菌感染查验方式
,
依照
GB/T 4789.11
开展检验。
,
A．
15
铜绿假单胞菌查验方式
,
依照
GB 7918.4
开展检验。
,
A．
16
橙黄色链球菌查验方式
,
依照
GB 7918.5
开展检验。
,
A．
17
别的总体目标微生物菌种查验方式
,
依照有关检验方式开展。
,
（规范化附则）
,
实验试剂和培养液
,
B．
1 0.03 moI/L
聚磷酸盐缓冲溶液
(0.03 moI/L PBS)
,
称量磷酸氢二钠
2.84 g
，磷酸二氢钾
1.36 g
，添加到
1000 mL
纯净水中，待彻底融解后，调
pH
至
7. 2
～
7.4
，于
121
℃工作压力蒸气杀菌
20 min
。
,
B．
2
过柱液
,
称量蛋白胨
10. 00 g
，氧化钠
8.50 g
，吐温
-80 1.0ML
，添加到
1 000 mL 0.03mol/L
聚磷酸盐缓冲溶液中，加温融解后调
pH
至
7.2
～
7.4
，于
121
℃工作压力蒸气杀菌
20 min
。
,
B．
3
盐水
,
称取氯化钠
8. 50 g
，融解于
1000 mL
纯净水中，于
121
℃工作压力蒸气杀菌
20 min
。
,
B．
4
革兰氏染色液及上色方式
,
B.4.1 结晶紫上色液：称取结晶紫
1.00 g
，融解于
20 mL 95%
乙醇中，随后与
80 mL 1%
草酸铵溶液混和。
,
B．
4.2
革兰碘液：称取碘
1. 00 g
，碘化钾
2.00 g
，混和后添加纯净水少量，充足振摇，待彻底融解后，再加纯净水至
300 mL
，搅拌。
,
B．
4.3
沙黄复染色液：称取沙黄
0. 25 g
，融解于
10 mL 95%
酒精溶液中，随后添加
90 mL
纯净水，搅拌。
,
B．
4.4
上色方式以下：
,
a)将玻片在火苗上固定不动。
,
b)滴入结晶紫上色液，功效
1 min
，水清洗。
,
c) 滴加革兰碘液，功效
1min
，水清洗。
,
d)乙醇褪色
30 s
；或将乙醇滴满全部玻片，马上倾去，再用乙醇滴满全部玻片，褪色
10 s
。
,
e)水清洗，滴沙黄复染色液，功效
1 min
，水清洗。
,
f) 待干镜检查。
,
B．
5
人（兔）血浆
,
取杀菌
3.8%
三聚磷酸钠
1
份，加微信好友（兔）全血
4
份，搅拌静放，
3 000 r
／
min
抽滤
5 min
，取上清，弃血球。
,
B．
6
一般营养成分琼脂培养液
,
B．
6.1
成份：蛋白胨
10 g
、牛肉膏
5G
、氧化钠
5G
、琼脂
15 g
、纯净水
1000 mL
。
,
B．
6.2
做法：除琼脂外别的成份融解于纯净水中，调
pH
至
7.2
～
7.4
，添加琼脂，加温融解，散装于
121
℃工作压力蒸气杀菌
20 min
。
,
B．
7
血琼脂培养液
,
B．
7.1
成份：营养成分琼脂
100 mL
、脱化学纤维羊血（或兔血）
10 mL
。
,
B．
7.2
做法：将营养成分琼脂加温熔融待冷至
50
℃上下，以无菌操作原则将
10 mL
脱化学纤维血添加后混匀，竭尽平皿，置电冰箱预留。,
B．
8
需
-
绿脓杆菌培养液
,
B．
8.1
成份：酪胨（胰酶水解反应）
15 g
、牛肉膏
4g
、葡萄糖
5G
、氯化钠
2.5 g
、
L-
胱氨酸
0.5 g
、硫酒精酸钠缓释片
0.5 g
、酵母菌浸取粉
5 g
、新鮮配置的
0.1%
刃天青水溶液
1
．
o mL
或新配置的
0.2%
亚甲蓝水溶液
0.5 mL
、琼脂
0.5 g
～
0. 7g
、纯净水
1 000 mL
。
,
B．
8.2
做法：除葡萄糖和刃天青水溶液外，取以上成份添加纯净水中，微温融解后，调
pH
至弱碱性，烧开、滤清，添加葡萄糖和刃天青水溶液，混匀，调
pH
至
6.9
～
7.3
，散装后
115
℃工作压力蒸气杀菌
30 min
。
,
B．
9 SCDLP
液体培养基
,
B．
9.1
成份：opo结构脂胨
17 g
、黄豆蛋白胨
4g
、葡萄糖
2.5 g
、氯化钠
5G
、磷酸氢二钾
2.5 g
、大豆卵磷脂
lg
、吐温
-80 7g
、纯净水
1 000 mL
。
,
B．
9.2
做法：将各种各样成份混和（如无opo结构脂胨和黄豆蛋白胨能用日本多胨替代），加温融解后，调
pH
至
7.2
～
7.3
，分装于
121
℃工作压力蒸汽灭菌
20 min
，混匀，冷至
25
℃应用。
,
B．
10
伊红美蓝培养液
,
B．
10.1
成份：蛋白胨
10 g
、乳清蛋白
10 g
、磷酸二氢钾
3g
、
2%
伊红水溶液
2 mL
、
0.65%
美蓝水溶液
1 mL
、琼脂
17 g
、纯净水
1000 mL
。
,
B．
10.2
做法：将蛋白胨、聚磷酸盐和琼脂融解于纯净水中，调
pH
至
7.1
，分装后
121
℃工作压力蒸汽灭菌
20 min
。临用时，以无菌操作原则添加乳清蛋白并加温融化琼脂，冷至
50
℃时，添加伊红和美蓝水溶液混匀，竭尽平皿，置
4
℃电冰箱预留。
,
B．
11 0.5%
葡萄糖水骨头汤培养液
,
B．
11.1
成份：胨
10 g
、氧化钠
5G
、葡萄糖水
5G
、肉浸液
1000 mL
。
,
B．
11.2
做法：取胨与氧化钠添加肉浸液内，微温融解后，调
pH
至弱碱性，烧开，添加葡萄糖水融解后，混匀，滤清，调
pH
至
7.0
～
7.4
，分装，于
115
℃压力蒸汽灭菌
30 min
。
,
B．
12
甘露醇培养液
,
B．
12.1
成份：蛋白胨
10 g
、牛肉膏
5G
、氧化钠
5G
、甘露醇
10 g
、
0.2%
溴麝香草酚蓝水溶液
12 mL
、纯净水
1 000 mL
。
,
B．
12.2
将蛋白胨、氧化钠、牛肉膏添加纯净水中，加温融解，调
pH
至
7.4
，添加甘露醇和溴麝香草酚
蓝搅拌后，散装，于115
℃
压力蒸汽灭菌20 min
。
,
B
．
13
乳清蛋白胆盐发醇管
GB 15982-2012,
B
．
13.1
成份：蛋白胨
20 g
、猪胆盐（或牛，羊胆盐）
5G
、乳清蛋白
10 g
、
0.04%
溴甲酚紫溶液
25 mL
、纯净水
1 000ML
。
,
B
．
13.2
做法：将蛋白胨、胆盐及乳清蛋白融解于纯净水中，调
pH
至
7.4
，添加
0.04%
溴甲酚紫溶液，散装
(
每管
10 mL)
，并放入一个发醇管，于
115
℃
工作压力蒸汽灭菌15 min
。
,
B
．
14
乳清蛋白发醇管
,
B
．
14.1
成份：蛋白胨
20 g
、乳清蛋白
10 g
、
0.04%
溴甲酚紫溶液
25mL
、纯净水
1 000 mL
。
,
B
．
14.2
做法：将蛋白胨及乳清蛋白融解于纯净水中，调
pH
至
7.4
，添加
0.04%
溴甲酚紫溶液，散装
(
每管
10 mL)
，并放入一个发醇管，于
115
℃
工作压力蒸汽灭菌15 min
。
,
B
．
15
溴甲酚紫葡萄糖水蛋白胨水培养液
,
B
．
15.1
成份：蛋白胨
10 g
、葡萄糖水
5G
、
2%
溴甲酚紫酒精溶液
0.6 mL
、纯净水
1000 mL
。
,
B
．
15.2
做法：将蛋白胨、葡萄糖水融解于纯净水中，调
pH
至
7
．
O
～
7.2
，添加
2%
溴甲酚紫酒精溶液，摇匀后，分装
(
每管
5 mL)
，并放进一个发醇管，于
115
℃
工作压力蒸气杀菌30 min
，置
4
℃
电冰箱预留。
,
B
．
16
绿脓菌素测量用培养液
,
B
．
16.1
胨
20 g
、氧化镁（没有水）
1.4 g
、硫酸铵
10 g
、凡士林
10 mL
、琼脂
18 g
～
20 g
、纯净水
1 000 mL
。
,
B
．
16.2
做法：取胨、氧化镁、硫酸铵添加水里，微温使融解，调整
pH
使杀菌后为
7.2
～
7.4
，分装于小试管婴儿，杀菌。
,
B
．
17
果胶培养液
,
B
．
17.1
胨
5 g
、果胶
120 g
、牛羊肉浸取粉
4g
、纯净水
1 000 mL
。
,
B
．
17.2
取以上各成分添加水里，浸泡约
20 min
，随时随地拌和，加温使融解，调整
pH
值使杀菌后为
7.2
～
7.4
，散装于小试管婴儿，杀菌。
,
B
．
18
常见问题
,
B
．
18.1
三料乳清蛋白胆盐发醇管除纯净水外，别的成分为乳清蛋白胆盐发醇管的
2
倍；
3
倍浓缩乳清蛋白胆盐发醇管除纯净水外，别的成分为乳清蛋白胆盐发醇管的
3
倍。
,
B
．
18.2
培养液用的试管婴儿口和三角烧瓶口运用棉塞或硅橡胶做成的瓶塞，再用包装纸包好。
,
B
．
18.3
实验试剂与培养液配置好后应置清理处储存，常温状态不超过
1
个月。培养液强烈推荐
4
℃
冷冻储存。,
医院消毒环境卫生规范
Hygienic standard for disinfection in hospitals
我国国家行业标准
GB 15982-2012 替代 GB 15982-1995
2012-06-29公布 2012-11-01实施
本规范的所有技术性內容为强制。
本规范替代GB 15982-1995《医院消毒卫生标准》。本规范与GB 15982-1995较为，关键转变以下：
――改动了规范的应用领域（见第1章，1995年版的第1章）；
――改动了规范化引入文档（见第2章，1995年版的第2章）；
――改动了专业术语，提升了二类医疗器械，医疗器械和高宽比、轻中度、轻度危险因素器械，杀菌和高质量、中水准、适度性消毒杀菌，多重耐药菌的界定（见第3章，1995年版的第3章）；
――改动了各种环境质量、物件表层、医务人员手质量标准（见4.1和4.2，1995年版的4.1）；
――改动了医用品质量标准（见4.3，1995年版的4.2）；
――改动了应用中消毒剂质量标准（见4.6，1995年版的4.3）；
――删除了无菌检测器材储存液质量标准（见1995年版的4.3.2）；
――提升了医治自来水、防护装备、消毒液和消毒器械、疫点（区）消毒杀菌的卫生要求（见4.4、4.5、4.6、4.7和4.9）；
――改动了废弃物解决质量标准和工业废水规范（见4.8，1995年版的4.4和4.5）；
――提升了医院消毒管理方法规定（见第5章）；
――改动了原附则A“取样及查验方式”（见附则A，1995年版的附则A）；
――改动了气体取样及查验方式（见A．2，1995年版的A.1）；
――改动了医用品取样及查验方式（见A.5，1995年版的A．5）；
――提升了医治自来水、紫外线灭菌灯、消毒器械、医院污水查验方式、疫点（区）消毒杀菌实际效果检验方式和肠子
有益菌查验方式(见A．7、A．8、A．9、A. 1o、A．11、A．12)；
――删除了原附则B“本规范措辞表明”(见1995年版的附录B)；
――提升了新附录B“实验试剂和培养液”(见附录B)。
本规范由我国国家卫生部明确提出并归口。
本规范拟定企业：浙江疾病防治监测中心、北京疾病防治监测中心、我国疾病防治监测中心、北京大学第一医院、北京市长江脉药业高新科技有限责任公司、杭州市朗索医用消毒剂有限责任公司、上海利康消毒杀菌新科技有限责任公司、强生公司（上海市）医疗器械有限责任公司、上海市九誉生物科技公司有限责任公司、北京市自主创新新世纪生物化学智能科技有限责任公司、国家卫生部卫生监督所管理中心、上海疾病防治监测中心、江苏疾病防治监测中心、武汉疾病防治监测中心、福建疾病防治监测中心、浙江省兴昌离心风机有限责任公司。
本规范关键起草人：胡国庆、邓小虹、张流波、李六亿、乔宏、戴彦臻、孙建生、卞梅瑰、谷京宇、沈伟、徐燕、梁建生、林云旺、陈楚晖、任银萍、刘俊、张一鸣。
本规范所替代规范的历年来版本号公布状况为：
――GB15982-1995
本标准了医院消毒质量标准、医院消毒管理方法规定及其查验方式。
本规范适用各个各种定点医疗机构。各个疾病防治操纵组织 和采供血组织 依照实行。
以下文档针对本规范的运用是不可或缺的。但凡注日期的引入文档，仅注日期的版本号适用本文档。但凡不注日期的引入文档，其最新版（包含全部的改动单）适用本文档。
GB 4789.3 食品类分子生物学检测 大肠杆菌记数
GB 4789.4 食品类分子生物学检测沙门菌检测
GB/T 4789.11 食品卫生安全分子生物学检测血溶链球菌感染检测
GB 5749 生活用水质量标准
GB 7918.4 护肤品微生物菌种规范检测方式绿脓杆菌
GB 7918.5 护肤品微生物菌种规范检测方式橙黄色链球菌
GB 18466 定点医疗机构水空气污染物环保标准
GB 19082 医疗一次性防护衣技术标准
GB 19083 医疗防尘口罩技术标准
GB 19193 疫源地消毒杀菌通则
GB 19258 紫外线消毒灯
GB 50333 医院门诊清洁手术室工程建筑技术标准
WS 310.1 医院消毒供货管理中心第1一部分：管理制度
WS 310.2 医院消毒供货管理中心第2一部分：清理消毒杀菌及杀菌技术性操作规范
WS 310.3 医院消毒供货管理中心第3一部分：清理消毒杀菌及杀菌实际效果检测规范
WS/T 311 医院隔离技术标准
WS/T 313 医护人员手卫生规范
YY 0469 医疗外科口罩技术标准
YY 0572 血透和有关医治自来水
消毒杀菌技术标准国家卫生部
医院门诊废水处理技术性手册 中华人民共和国财政部
我国中国药典国家卫生部
医疗服务组织 医疗废弃物管理条例国家卫生部
以下专业术语和界定适用本文档。
3.1
二类医疗器械 disinfection product
列入国家卫生部《消毒产品分类目录》，用以医院消毒的消毒液、消毒器械和日用品。
3.2 医疗器械 medical device／health care product
用以确诊、医治、医护、适用、取代的器材、器材和物件的统称。依据应用中导致感柒的风险水平，分高宽比危险因素医疗器械、轻中度危险因素医疗器械和轻度危险因素医疗器械。
3.2.1高宽比危险因素医疗器械 critical device/items
进到一切正常无菌检测机构、脉管系统或有无菌检测血液（如血夜）穿过，一旦被微生物菌种环境污染将造成 极高感柒风险的器械。
3.2.2中度危险性医疗器材 semi-critical device／items
立即或间接接触粘膜的器械。
3.2.3轻度危险性医疗器材 no-critical device/items
仅与详细肌肤触碰而不与粘膜触碰的器械。
3.3
杀菌 sterilization
消灭或消除医疗器材上一切微生物菌种的解决。杀菌的无菌检测确保水准应做到10-6。
3.4
高质量消毒杀菌 high-level disinfection
消灭各种各样细菌繁殖体、病毒感染、细菌以及胞子和绝大部分细菌芽孢的消毒杀菌解决。
3.5
中水准消毒杀菌 intermediate-level disinfection
消灭除细菌芽孢之外的各种各样微生物的消毒杀菌解决。
3.6
适度性消毒杀菌 low-level disinfection
仅能消灭细菌繁殖体（分枝杆菌以外）和亲脂病毒感染的消毒杀菌解决。
3.7多重耐药菌 multidrug-resistant organism; MDRO
对临床医学应用的三类或三类之上抗菌药另外展现抗药性的病菌。普遍多重耐药菌包含耐甲氧西林橙黄色链球菌(MRSA)、耐万古霉素肠球菌(VRE)、产超广谱性β一内酰胺酶(ESBLs)病菌、耐碳青霉烯类抗菌药肠杆菌科病菌(CRE)（如产I型墨西哥城金属材料β内酰胺酶[NDM-1]或产碳青霉烯酶[KPC]的肠杆菌科病菌）、耐碳青霉烯类抗菌药鲍曼不动杆菌( CR-AB)、多重耐药／泛抗药性铜绿假单胞菌(MDR/PDR-PA)和多重耐药结核分枝杆菌等。
4.1 各种环境质量、物件表层
4.1.1 菌落总数应合乎表1规定。
I类自然环境为选用气体清洁技术性的诊治场地，分清洁手术室和别的清洁场地。Ⅱ类自然环境为非清洁手术室（室）；待产室；导管室；血液疾病病房、烫伤病房等保护性隔离病房；重症监护室病房；新生婴儿室等。Ⅲ类自然环境为母婴用品同室；消毒杀菌供货管理中心的查验包裝杀菌区和无菌检测物件储放区；血透管理中心（室）；别的一般住院治疗病房等。Ⅳ类自然环境为一般门（急）诊以及查验、诊断室；传染性疾病科医院门诊和病房。
表1 各种环境质量、物件表层菌落总数质量标准
| 环境类别 |
气体均值菌体数a |
物件表层均值菌体数CFU/cm2 |
||
| CFU／皿 |
CFU/m3 |
|||
| I类自然环境 |
清洁手术室 |
合乎GB 50333规定 |
≤150 |
≤5．0 |
| 别的清洁场地 |
≤4. 0(30 min)b |
|||
| Ⅱ类环境 |
≤4. 0(15 min) |
-- |
≤5．0 |
|
| Ⅲ类环境 |
≤4. 0(5 min) |
-- |
≤10．0 |
|
| Ⅳ类环境 |
≤4.0(5 min) |
-- |
≤10．0 |
|
| a CFU／皿为平板电脑曝露法，CFU/m3为空气采样器法。 b 平板电脑曝露法检验时的平板电脑曝露時间。 |
||||
4.1.2猜疑院内感染爆发或疑是爆发与医院门诊环境相关时，应开展总体目标微生物检验。
4.2 医护人员手
4.2.1 卫生手消毒后医护人员手表层的菌落总数应≤10 CFU/cm2。
4.2.2 外科手消毒后医护人员手表层的菌落总数应≤5 CFU/cm2。
4.3 医疗器械
4. 3.1 高宽比危险因素医疗器械应无菌检测。
4.3.2 中度危险性医疗器材的菌落总数应≤20 CFU/件（CFU/g或CFU／100 cm2），不可验出高致病微生物菌种。
4.3.3 轻度危险性医疗器材的菌落总数应≤200 CFU/件(CFU/g或CFU／100 cm2)，不可验出高致病微生物菌种。
4.4医治自来水
血透有关医治自来水应合乎YY 0572规定；别的医治自来水应合乎相对质量标准。
4.5 防护装备
医疗防尘口罩、外科口罩和一次性防护衣等防护装备应合乎GB 19083、YY 0469和GB 19082
规定。
4.6消毒液
4.6.1 灭菌剂、皮肤黏膜消毒液应应用合乎《中华人民共和国药典》的纯水系统或无菌水配置，别的消毒液的配置自来水应合乎GB 5749规定。
4.6.2应用中消毒剂的合理浓度值应合乎应用规定；持续应用的消毒剂每日应用前要开展合理浓度值的检测。
4.6.3杀菌用消毒剂的菌落总数应是0 CFU／mL；皮肤黏膜消毒剂的菌落总数应合乎相对规范规定；别的应用中消毒剂的菌落总数应≤100 CFU／mL，不可验出高致病微生物菌种。
4.7消毒器械
4.7.1应用中消毒器械的除菌因素抗压强度应合乎应用规定。紫外线灭菌灯应合乎GB 19258规定，应用中紫外线灭菌灯(30 W)的辐射源光照强度值应≥70 uW/cm2。
4.7.2办公环境中消毒器械造成的有害物质浓度值（抗压强度）应合乎有关要求。造成活性氧的消毒器械的办公环境的二氧化碳浓度应<0.16 mg／m3。环氧乙烷蒸汽灭菌器办公环境的环氧乙烷浓度值应<2 mg／m3。
4.8废水处理
工业废水应合乎GB 18466规定。
4.9疫点（区）消毒杀菌
消毒杀菌实际效果应合乎GB 19193规定。
5.1 工程建筑合理布局和消毒隔离设备
5.1.1建筑规划设计和工作内容应合乎传染病防控和院内感染操纵必须，消毒隔离设备配备应合乎
WS/T 311和《消毒技术规范》相关要求。
5.1.2传染性疾病科、消毒杀菌供货管理中心（室）、手术室（室）、重症监护室病房、血透管理中心（室）、新生婴儿室、内窥镜管理中心（室）和口腔牙科等关键单位的工程建筑合理布局和消毒隔离应合乎有关要求。
5.1.3清洁场地的设计方案、工程验收参考GB 50333规定，完工全特性检测应由有资质证书的第三方企业进行。
5.1.4 Ⅱ类自然环境和门（急）诊、病房等诊治场地应按WS/T 313规定，配备适合的手卫生设备，出示满足要求的洗手消毒清洁液、手消毒剂及其干手设备等。
5.2二类医疗器械应用管理方法
5.2.1 应用的二类医疗器械应合乎相关法律法规政策法规、规范和标准等管理规定，并依照准许或要求的范畴和方式应用。
5.2.2 含氯消毒液、双氧水消毒剂等容易挥发的消毒液应现配现用；次氯酸钠溶液、二氧化氯等二元、多元化包裝的消毒剂活性后应该马上应用。选用有机化学消毒杀菌、杀菌的医疗器械，应用前运用无菌水（高质量消毒杀菌的内窥镜可应用经过虑的生活用水）充足清洗以除去残余。不可应用到期、无效的消毒液。不可选用室内甲醛当然蒸熏方式消毒杀菌医疗器械。不可选用戊二醛蒸熏方式消毒杀菌、杀菌管腔类医疗器械。
5.2.3 蒸汽灭菌器如需开展杀菌实际效果认证，应由省部级之上环境卫生行政机关评定的消毒杀菌评定试验室开展检验。杀菌物件的无菌检测查验应按《中华人民共和国药典》“无菌检测检测法”规定开展。应用消毒器械杀菌的消毒员应经学习培训达标后才可入岗。
5.3 多次重复使用医疗器械的清理
清理程序流程应按WS 310.2实行。有特别要求的传染性疾病病原菌环境污染的医疗器械先要消毒杀菌再清理。
5.4 消毒灭菌方式挑选标准
5.4.1 高宽比危险因素医疗器械应用前要杀菌。轻中度危险因素医疗器械应用前要挑选高质量消毒杀菌或中水准消毒杀菌。轻度危险因素器械应用前可挑选中、适度性消毒杀菌或保持干净。
5.4.2 耐水、耐高温的医疗器械应优选工作压力蒸气杀菌；带管腔和（或）带闸阀的器械应选用经杀菌全过程认证装置( PCD)确定的杀菌程序流程或外界器材经销商出示的灭菌方法。
5.4.3 夹层玻璃器械、除油剂和粉剂类物件等应优选干热灭菌；别的方式应合乎《消毒技术规范》要求。
5.4.4 不耐高温、不抗湿的医疗器械应挑选经国卫行政机关准许的超低温灭菌方法。
5.4.5 多次重复使用的co2湿化瓶、吸引住瓶、宝宝暖箱水瓶座及其升温增湿罐等宜选用高质量消毒杀菌。
5.5 自然环境、物件表层消毒杀菌
5.5.1 自然环境、物件表层应保持干净；当遭受人眼由此可见环境污染时要立即清理、消毒杀菌。
5.5.2 对治疗车、床栏、床柜、门拉手、灯开关、自来水龙头等经常触碰的物件表层应每日清理、消毒杀菌。
5.5.3 被患者血夜、排泄物、粪便或微生物环境污染时，应依据详细情况，挑选中水准之上消毒方法。针对小量（<10 mL)的溅污，可先清理再消毒杀菌；针对很多(>10 mL)血夜或血液的溅污，先要用吸潮原材料除去由此可见的环境污染，随后再清理和消毒杀菌。
5.5.4 人员流动经常、拥堵的诊治场地应每日在工作中完毕后开展清理、消毒杀菌。传染性疾病科、重症监护室病房、保护性隔离病房（如血液疾病病房、烫伤病房）、耐药菌及多重耐药菌环境污染的诊治场地应搞好随时随地消毒杀菌和终末消毒。
5.5.5 拖把（头）和毛巾宜清理、消毒杀菌，干躁储备用。强烈推荐应用脱卸式式拖头。
5.6 通风换气和室内消毒
5.6.1 应选用空气流通和（或）机械设备自然通风确保诊治场地的室内通风和换风；选用机械设备自然通风时，重症监护室医院病房等关键单位宜选用“顶排风、下侧送风”，创建有效的自然通风。
5.6.2 呼吸道发热医院门诊以及防护留观病区（区）、呼吸系统传染性疾病接诊病房如选用集中空调排风系统的，应在排风系统安裝室内消毒装置。未选用气体清洁技术性的诊室、重症监护室病房、保护性隔离病房（如血液疾病病房、烫伤病房）等场地宜在排风系统安裝室内消毒装置。
5.6.3 室内消毒方式应遵照《消毒技术规范》要求。不适合基本选用有机化学喷雾器开展室内消毒。
5.7 消毒杀菌供货管理中心（室）的管理方法
消毒杀菌供货管理中心（室）的工程建筑合理布局及其清理、消毒灭菌和实际效果检测应实行WS.310规定。
5.8 废水废弃物解决
5.8.1 医院门诊废水处理设备的设计方案、基本建设和管理方法应合乎GB 18466和《医院污水处理技术指南》规定。
5.8.2 医疗废弃物的管理方法应合乎《医疗废物管理条例》、《医疗卫生机构医疗废物管理办法》的规定。
5.9 疫点（区）消毒杀菌
应合乎GB 19193规定。
（规范化附则）
采样及检查方式
A.1 采样和检查标准
A．1.1 采样后应尽早对试品开展相对指标值的检验，复检時间不可超出4 h；若试品储存于O℃～4℃时，复检時间不可超出24 h。
A．1.2 不强烈推荐医院门诊基本进行杀菌物件的无菌检测检查，当临床流行病学调研猜疑院内感染事情与杀菌物件相关时，开展相对物件的无菌检测检查。基本监管检查并不开展高致病微生物检验，涉及到疑是院内感染爆发、院内感染爆发调研或工作上猜疑微生物菌种环境污染时，应开展总体目标微生物菌种的检验。
A．1.3 可应用工作经验证的当场迅速测试仪器开展自然环境、物件表层等微生物菌种环境污染状况和医疗器械洁净度的监管筛选；也可用以医院门诊清理实际效果检查和清理程序流程的点评和认证。
A.2 气体微生物菌种环境污染检查方式
A.2.1 采样時间
I类自然环境在清洁系统软件自净作用后与从业诊疗主题活动前采样；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类自然环境在消毒杀菌或要求的通风换气后与从业诊疗主题活动前采样。
A.2.2 检验方式
A.2.2.1 I类自然环境可挑选平板电脑曝露法和气体采样器法，参考GB 50333《医院洁净手术部建筑技术规范》规定开展检验。气体采样器法可挑选六级碰撞式气体采样器或别的工作经验证的气体采样器。检验时将采样器放置房间内中间0.8 m～l.5 m高宽比，按采样器使用手册实际操作，每一次采样時间不可超出30 min。屋子超过10 m2者，每提升10 m2加设一个采样点。
A．2.2.2 Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类自然环境选用平板电脑曝露法。房间内总面积≤30 m2，设内、中、外直线3点，内、外点应距墙面1米处；房间内总面积>30 m2，设4角及中间5点，4角的布点部位应距墙面1米处。将一般营养成分琼脂平皿(直徑90 mm)置放各取样点，取样高宽比为距路面0.8 m～l.5 m;取样时将平皿盖开启，扣放于平皿旁，曝露要求時间(Ⅱ类自然环境曝露15 min，Ⅲ、Ⅳ类自然环境曝露5 min)后盖板上平皿盖立即复检。
A．2.2.3将复检平皿置36℃±1℃恒温箱塑造48 h，记数菌体数，必需时分离出来高致病微生物菌种。
A.2.3 結果测算
A．2.3.1 平板电脑曝露法按均值每皿的菌体数汇报：CFU/（皿?曝露時间）。
A．2.3.2式(1)为空气采样器法计算方法：
A．3 物件表层微生物菌种环境污染查验方式
A．3.1 取样時间
潜在污染区、污染消毒杀菌后取样。清洁区依据当场状况明确。
A．3.2 取样总面积
被采表层<100 cm2，取所有表层；被采表层≥100 cm2，取100 cm2。
A．3.3 取样方式
用5 cm×5 cm杀菌规格型号板放到被检物件表层，用浸有无菌检测0.03 mol／L聚磷酸盐缓冲溶液或盐水取样液的棉拭子1支，在规格型号板内横纵来回各擦抹5次，并随着旋转棉拭子，持续取样1～4个规格型号板总面积，剪去手触碰一部分，将棉拭子放进配有10 mL取样液的试管婴儿中复检。门拉手等中小型物件则选用棉拭子立即擦抹物件取样。若取样物件表层有消毒液残余时，取样液应含相对还原剂。
A．3.4 检验方式
把取样管充足震荡后，取不一样稀释倍数的过柱液1.0 mL打疫苗平皿，将冷至40℃～45℃的熔融营养成分琼脂培养液每皿竭尽15 mL～20 mL，36℃±1℃恒温箱塑造48 h，记数菌体数，必需时分离出来高致病微生物菌种。
A．3.5 結果测算[如式(A．2)]
A.4 医护人员手卫生查验方式
A.4.1 取样時间
采用手卫生后，在触碰患者或从业诊疗主题活动前取样。
A.4.2 取样方式
将浸有无菌检测0.03 mol／L聚磷酸盐缓冲溶液或盐水取样液的棉拭子一支在两手指斜面从指跟得指端往返涂擦各2次（一只手涂擦总面积约30 cm2），并随着旋转取样棉拭子，剪去手触碰位置，将棉拭子放进配有10 mL取样液的试管婴儿内复检。取样总面积按立方厘米(cm2)测算。若采样时手里有消毒剂残余，采样液应含相对中和剂。
A.4.3 检验方式
把采样管充足震荡后，取不一样稀释倍数的过柱液1．O mL打疫苗平皿，将冷至40℃～45℃的熔融营养成分琼脂培养液每皿竭尽15 mL～20 mL，36℃±1℃恒温箱塑造48 h，记数菌体数，必需时分离出来高致病微生物菌种。
A．4.4 結果测算[如式(A．3)]
A．5 医疗器械查验方式
A．5.1 采样時间
在消毒杀菌或杀菌解决后，储放有效期限内采样。
A.5.2 杀菌医疗器械的查验方式
A．5.2.1 能用毁灭性方式抽样的，如一次性打点滴（血）器、注射针和注射器等依照《中华人民共和国药典》中“无菌检测检测法”开展。对不能用毁灭性方式抽样的医疗器械，应在自然环境洁净度等级10 000级下的部分洁净度等级100级的单边流气体地区内或防护系统软件中，用浸有无菌检测盐水采样液的棉拭子在被检物件表层擦抹，采样取所有表层或不少于100 cm2；随后将去除手触碰一部分的棉拭子开展无菌检测查验。
A．5.2.2 牙科手机：应在自然环境洁净度等级10 000级下的部分洁净度等级100级的单边流气体地区内或防护系统软件中，将每一个手机上各自放置含20 mL～25 mL取样液的无菌检测大试管婴儿(內径25 mm)中，液位高宽比应超过4.0 cm，于旋涡混合器上清洗波动30 s之上，取过柱液开展无菌检测查验。
A.5.3 消毒杀菌医疗器械的查验方式
A．5.3.1 可整个放进无菌检测试管婴儿的，用过柱液浸入后波动30 s之上，取过柱液1．O mL打疫苗平皿，将冷至40℃～45℃的熔融营养成分琼脂培养液每皿竭尽15 mL～20 mL，36℃±1℃恒温箱塑造48 h，记数菌体数(CFU/件)，必需时分离出来高致病微生物菌种。
A．5.3.2 能用毁灭性方式抽样的，在100级净化工作台称量1 g―lo g试品，放进配有10 mL取样液的试管婴儿内开展过柱，取过柱液1．O mL打疫苗平皿，记数菌体数(CFU/g)，必需时分离出来高致病微生物菌种。对不能用毁灭性方式抽样的医疗器械，在100级净化工作台，用浸有无菌检测盐水取样液的棉拭子在被检物件表层擦抹取样，被采表层<100 cm2，取所有表层，被采表层≥100 cm2，取100 cm2，随后将去除手触碰一部分的棉拭子开展过柱，取过柱液1．0 mL打疫苗平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养成分琼脂培养基每皿倾注15 mL～20 mL，36℃±1℃恒温箱塑造48 h，记数菌体数(CFU/cm2)，必需时分离出来高致病微生物菌种。
A．5.3.3 消毒杀菌后内窥镜：取清理消毒杀菌后内窥镜，选用无菌检测注射针提取50 mL含相对还原剂的过柱液，从穿刺活检口引入清洗内窥镜管道，并全量搜集（可应用隔膜泵）复检。将过柱液充足搅拌，取过柱液1.0 mL打疫苗平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养成分琼脂培养基每皿倾注15 mL～20 mL，36℃±1℃恒温箱塑造48 h，记数菌体数(CFU/件)。将剩下过柱液在无菌检测标准下选用滤纸(0. 45 μm)过虑浓缩，将滤纸打疫苗于凝结的营养成分琼脂平板电脑上（留意不必造成汽泡），置36℃±1℃温箱塑造48 h，记数菌体数。
当滤膜法不计其数时：
菌落总数（CFU/件）=m(CFU/平板电脑)×50 ……(A．4)
式中：
m-两平行面平板电脑的均值菌体数。
当滤膜法可计数时：
菌落总数（CFU/件）=m(CFU/平板) mf（CFU/滤膜） …………(A．5)
式中：
m-两平行面平板的均值菌体数；
mf -滤膜上菌体数。
A.6 消毒液查验方式
A.6.1 消毒液取样
取样分库存量消毒液和应用中消毒剂。
A．6.2 消毒液成分成分查验方式
库存量消毒液的成分成分应按照《消毒技术规范》或商品产品标准开展检验；应用中消毒剂的合理浓度值测量能用上述情况方式，也可应用经国卫行政机关准许的消毒液浓度值测纸（卡）开展检测。
A．6.3应用中消毒剂染菌量查验方式
A．6.3.1 用无菌检测塑料吸管按无菌操作原则方式汲取1.0 mL被检消毒剂，添加9 mL还原剂中搅拌。醛类与酚类消毒剂用一般营养成分骨头汤中合，含氯消毒剂、含碘消毒液和氯丁二烯消毒液用含0.1%硫代硫酸钠还原剂，洗必泰、季铵盐类消毒液用含0.3%吐温80和0.3%大豆卵磷脂还原剂，代烃消毒液用含0.3%甘氨酸还原剂，带有表活剂的各种各样棘籽消毒液可在还原剂中添加吐温80至3%;也可应用该消毒液消毒杀菌实际效果检验的还原剂评定实验明确的还原剂。
A．6.3.2 用无菌检测塑料吸管汲取一定稀释液占比的中合后溶液1.0 mL打疫苗平皿，将冷至40℃～45℃的熔融营养成分琼脂培养液每皿竭尽15 mL～20 mL，36℃±1℃恒温箱培养72 h，记数菌体数；必需时分离出来高致病微生物菌种。
消毒剂染菌量(CFU／mL)=均值每皿菌体数×10×稀释倍数 …………(A．6)
A．7医治自来水查验方式
血透有关医治自来水按YY 0572开展检验。别的医治自来水依照有关规范实行。
A．8 紫外线灭菌灯查验方式
A．8.1 紫外线灭菌灯取样
取样分库存量紫外线灭菌灯和应用中紫外线灭菌灯。
A．8.2库存量（新开启）紫外线灭菌灯辐射源光照强度值查验方式
依照GB 19258开展。
A．8.3应用中紫外线灭菌灯辐射源光照强度值查验方式
A．8.3.1 仪器设备法。打开紫外线灭菌灯5 min后，将测量光波长为253.7 nm的紫外光辐照度计摄像头放置被检紫外线灭菌灯下安全距离1米的中间处，待仪表盘平稳后，所显示数据信息即是该紫外线灭菌灯的辐射源光照强度值。
A．8.3.2 标示卡法。打开紫外线灭菌灯5 min后，将标示卡置紫外线杀菌灯下安全距离1米处，有图案设计一面朝上，直射1 min，观查标示卡图形的色调，将其与规范图形较为。
A．8.4常见问题
紫外光辐照度计应在计量检定单位计量检定的有效期限内应用；紫外光检测标示卡应获得国卫行政机关的批准批文，并在商品有效期限内应用。
A．9 消毒器械查验方式
A．9.1 除菌因素抗压强度测量：按《消毒技术规范》或公司标准的方式开展检验。
A．9.2办公环境有害物质浓度值（抗压强度）测量：按《消毒技术规范》或有关标准的方式开展检验。
A．10 医院污水查验方式
按GB 18466要求开展检验。
A. 11 疫点（区）消毒杀菌实际效果检验方式
按GB 19193要求开展检验。
A．12 大肠杆菌查验方式
依照GB 4789.3开展检验。
A．13 沙门茵查验方式
依照GB 4789.4开展检验。
A. 14 乙型肝炎血溶链球菌感染查验方式
依照GB/T 4789.11开展检验。
A．15 铜绿假单胞菌查验方式
依照GB 7918.4开展检验。
A．16 橙黄色链球菌查验方式
依照GB 7918.5开展检验。
A．17 别的总体目标微生物菌种查验方式
依照有关检验方式开展。
（规范化附则）
实验试剂和培养液
B．1 0.03 moI/L聚磷酸盐缓冲溶液(0.03 moI/L PBS)
称量磷酸氢二钠2.84 g，磷酸二氢钾1.36 g，添加到1000 mL纯净水中，待彻底融解后，调pH至7. 2～7.4，于121℃工作压力蒸气杀菌20 min。
B．2过柱液
称量蛋白胨10. 00 g，氧化钠8.50 g，吐温-80 1.0ML，添加到1 000 mL 0.03mol/L聚磷酸盐缓冲溶液中，加温融解后调pH至7.2～7.4，于121℃工作压力蒸气杀菌20 min。
B．3盐水
称量氧化钠8. 50 g，融解于1000 mL纯净水中，于121℃工作压力蒸气杀菌20 min。
B．4 革兰氏染色液及上色方式
B.4.1 结晶紫上色液：称量结晶紫1.00 g，融解于20 mL 95%乙醇中，随后与80 mL 1%草酸铵溶液混和。
B．4.2革兰碘液：称量碘1. 00 g，碘化钾2.00 g，混和后添加纯净水少量，充足振摇，待彻底融解后，再加纯净水至300 mL，搅拌。
B．4.3沙黄复染色液：称量沙黄0. 25 g，融解于10 mL 95%酒精溶液中，随后添加90 mL纯净水，搅拌。
B．4.4上色方式以下：
a)将玻片在火苗上固定不动。
b)滴入结晶紫上色液，功效1 min，水清洗。
c) 滴加革兰碘液，功效1min，水清洗。
d)乙醇褪色30 s；或将乙醇滴满全部玻片，马上倾去，再用乙醇滴满全部玻片，褪色10 s。
e)水清洗，滴沙黄复染色液，功效1 min，水清洗。
f) 待干镜检查。
B．5人（兔）血液
取杀菌3.8%三聚磷酸钠1份，加微信好友（兔）全血4份，搅拌静放，3 000 r／min抽滤5 min，取上清，弃血球。
B．6 一般营养成分琼脂培养液
B．6.1 成份：蛋白胨10 g、牛肉膏5G、氧化钠5G、琼脂15 g、纯净水1000 mL。
B．6.2做法：除琼脂外别的成份融解于纯净水中，调pH至7.2～7.4，添加琼脂，加温融解，散装于121℃工作压力蒸气杀菌20 min。
B．7血琼脂培养液
B．7.1 成份：营养成分琼脂100 mL、脱化学纤维羊血（或兔血）10 mL。
B．7.2做法：将营养成分琼脂加温熔融待冷至50℃上下，以无菌操作原则将10 mL脱化学纤维血添加后混匀，竭尽平皿，置电冰箱预留。
B．8 需-绿脓杆菌培养液
B．8.1成份：酪胨（胰酶水解反应）15 g、牛肉膏4g、葡萄糖水5G、氧化钠2.5 g、L-胱氨酸0.5 g、硫酒精酸钠缓释片0.5 g、酵母菌浸取粉5 g、新鮮配置的0.1%刃天青溶液1．o mL或新配置的0.2%亚甲蓝溶液0.5 mL、琼脂0.5 g～0. 7g、纯净水1 000 mL。
B．8.2做法：除葡萄糖水和刃天青溶液外，取以上成份添加纯净水中，微温融解后，调pH至弱碱性，烧开、滤清，添加葡萄糖水和刃天青溶液，混匀，调pH至6.9～7.3，散装后115℃工作压力蒸气杀菌30 min。
B．9 SCDLP液体培养基
B．9.1 成份：opo结构脂胨17 g、黄豆蛋白胨4g、葡萄糖水2.5 g、氧化钠5G、磷酸氢二钾2.5 g、大豆卵磷脂lg、吐温-80 7g、纯净水1 000 mL。
B．9.2做法：将各种各样成份混和（如无opo结构脂胨和黄豆蛋白胨能用日本多胨替代），加温融解后，调pH至7.2～7.3，散装于121℃工作压力蒸气杀菌20 min，混匀，冷至25℃应用。
B．10伊红美蓝培养液
B．10.1成份：蛋白胨10 g、乳清蛋白10 g、磷酸二氢钾3g、2%伊红水溶液2 mL、0.65%美蓝水溶液1 mL、琼脂17 g、纯净水1000 mL。
B．10.2做法：将蛋白胨、聚磷酸盐和琼脂融解于纯净水中，调pH至7.1，散装后121℃工作压力蒸气杀菌20 min。临用时，以无菌操作原则添加乳清蛋白并加温融化琼脂，冷至50℃时，添加伊红和美蓝水溶液混匀，竭尽平皿，置4℃电冰箱预留。
B．11 0.5%葡萄糖水骨头汤培养液
B．11.1 成份：胨10 g、氧化钠5G、葡萄糖水5G、肉浸液1000 mL。
B．11.2做法：取胨与氧化钠添加肉浸液内，微温融解后，调pH至弱碱性，烧开，添加葡萄糖水融解后，混匀，滤清，调pH至7.0～7.4，散装，于115℃工作压力蒸气杀菌30 min。
B．12甘露醇培养液
B．12.1 成份：蛋白胨10 g、牛肉膏5G、氧化钠5G、甘露醇10 g、0.2%溴麝香草酚蓝溶液12 mL、纯净水1 000 mL。
B．12.2 将蛋白胨、氧化钠、牛肉膏添加纯净水中，加温融解，调pH至7.4，添加甘露醇和溴麝香草酚蓝搅拌后，散装，于115℃工作压力蒸气杀菌20 min。
B．13 乳清蛋白胆盐发醇管 GB 15982-2012
B．13.1成份：蛋白胨20 g、猪胆盐（或牛，羊胆盐）5G、乳清蛋白10 g、0.04%溴甲酚紫水溶液25 mL、纯净水1 000ML。
B．13.2做法：将蛋白胨、胆盐及乳清蛋白融解于纯净水中，调pH至7.4，添加0.04%溴甲酚紫水溶液，散装(每管10 mL)，并放进一个发醇管，于115℃工作压力蒸气杀菌15 min。
B．14乳清蛋白发醇管
B．14.1 成份：蛋白胨20 g、乳清蛋白10 g、0.04%溴甲酚紫溶液25mL、纯净水1 000 mL。
B．14.2做法：将蛋白胨及乳清蛋白融解于纯净水中，调pH至7.4，添加0.04%溴甲酚紫溶液，散装(每管10 mL)，并放进一个发醇管，于115℃工作压力蒸气杀菌15 min。
B．15溴甲酚紫葡萄糖水蛋白胨水培养液
B．15.1 成份：蛋白胨10 g、葡萄糖水5G、2%溴甲酚紫酒精溶液0.6 mL、纯净水1000 mL。
B．15.2做法：将蛋白胨、葡萄糖水融解于纯净水中，调pH至7．O～7.2，添加2%溴甲酚紫酒精溶液，混匀后，散装(每管5 mL)，并放进一个发醇管，于115℃工作压力蒸气杀菌30 min，置4℃电冰箱预留。
B．16绿脓菌素测量用培养基
B．16.1 胨20 g、氧化镁（没有水）1.4 g、硫酸铵10 g、凡士林10 mL、琼脂18 g～20 g、纯净水1 000 mL。
B．16.2做法：取胨、氧化镁、硫酸铵添加水里，微温使融解，调整pH使杀菌后为7.2～7.4，散装于小试管婴儿，杀菌。
B．17 果胶培养基
B．17.1 胨5 g、果胶120 g、牛羊肉浸取粉4g、纯净水1 000 mL。
B．17.2取以上各成份添加水里，泡浸约20 min，随时随地拌和，加温使融解，调整pH值使杀菌后为7.2～7.4，散装于小试管婴儿，杀菌。
B．18 常见问题
B．18.1 三料乳清蛋白胆盐发醇管除纯净水外，别的成份为乳清蛋白胆盐发醇管的2倍；3倍浓缩乳清蛋白胆盐发醇管除纯净水外，别的成份为乳清蛋白胆盐发醇管的3倍。
B．18.2培养液用的试管婴儿口和三角烧瓶口运用棉塞或硅橡胶做成的瓶塞，再用包装纸包好。
B．18.3实验试剂与培养液配置好后应置清理处储存，常温状态不超过1个月。培养液强烈推荐4℃冷冻储存。
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